Interferência do tspo sobre as vias de ativação de adipócitos da linhagem 3t3-l1

Resumo

A obesidade é associada a uma inflamação crônica de baixa intensidade e representa um dos fatores de risco para o desenvolvimento de uma série de co-morbidades, tais como a resistência à insulina e o desenvolvimento do diabetes mellitus do tipo 2. O receptor TSPO (translocator protein 18kDa) está envolvido em inúmeras funções celulares, incluindo biossíntese e transporte de esteróides, transporte de porfirinas, apoptose, biossíntese do heme, transporte de íons, respiração celular, processos oxidativos e imunomodulação. No entanto, a presença e função do TSPO no tecido adiposo e na obesidade ainda não está bem estabelecida. Nosso grupo de pesquisa vem desenvolvendo trabalhos com o objetivo de esclarecer o papel imunomodulador do receptor TSPO e, desta forma, no presente projeto, propomos avaliar a expressão e função do TSPO em células adiposas da linhagem 3T3-L1, bem como a ação do TSPO na polarização de macrófagos Raw 264.7. Para tanto, as células 3T3-L1 e Raw 264.7 serão tratadas ou não com os agonistas Diazepam e/ou Ro5-4864 e/ou o antagonista PK11195 e, ainda, estimuladas ou não com LPS. Será investigado a expressão gênica de TSPO na linhagem Raw 264.7 e no processo de diferenciação da linhagem 3T3-L1 por RT-PCR em tempo real, bem como o metabolismo da glicose e, a expressão protéica de GLUT-4 e TSPO na linhagem 3T3-L1 por Western blot. A viabilidade, proliferação, fragmentação de DNA e ciclo celular de pré-adipócitos 3T3-L1 e a capacidade dos ligantes de TSPO induzirem a polarização de macrófagos da linhagem Raw 264.7 em co-cultura de adipócitos serão analisados por citometria de fluxo. A secreção de mediadores inflamatórios (TNF, MCP-1, adiponectina, resistina, leptina, IL-6, IL-10 e IL-12) será quantificada no sobrenadante das culturas e co-culturas por ensaios imunoenzimáticos; a atividade metabólica das células 3T3-L1 será analisada por MTT e, a lipólise e o acúmulo de triacilglicerol serão analisados por ensaios colorimétricos. Desta forma, poder-se-á caracterizar e melhor compreender a participação do receptor TSPO nas vias inflamatórios e metabólicas do tecido adiposo e no processo de polarização de macrófagos, além da própria ação de macrófagos sobre os mecanismos inflamatórios e metabólicos do tecido adiposo.