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Identificação e produção de anticorpos contra proteínas sexo específicas do espermatozóide bovino

Processo: 13/23351-3
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de março de 2014
Vigência (Término): 31 de agosto de 2017
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Pesquisador responsável:José Antonio Dell'Aqua Junior
Beneficiário:Caroline Scott
Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
Bolsa(s) vinculada(s):15/25698-6 - Identificação de proteínas sexo-específicas do espermatozoide bovino, BE.EP.DR
Assunto(s):Espectrometria de massas
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:anticorpos sexo-específicos | Dige | espectrometria de massa | sêmen sexado | Biotecnologia do sêmen

Resumo

A sexagem de espermatozoides, para a obtenção de doses de sêmen com alta porcentagem de gametas portadores do cromossomo X ou Y, torna ainda mais relevante o papel da inseminação artificial na maximização do progresso genético entre gerações; na produtividade e retorno econômico em algumas atividades pecuárias; na reprodução assistida em mamíferos; e no aconselhamento genético da espécie humana. Assim, os objetivos, do presente projeto serão estudar um método mais adequado para solubilização das proteínas da membrana plasmática de espermatozoides; separar por eletroforese 2D-DIGE as proteínas da membrana de espermatozoides contendo os cromossomos X ou Y de bovinos a fim de selecionar proteínas sexo-específicas; identificar os resíduos de aminoácidos das proteínas de interesse pela espectrometria de massa; produzir anticorpos sexo-específicos pela imunização heteróloga (galinhas); e verificar a eficiência da ligação desses anticorpos aos espermatozoides bovinos. Serão testados 3 protocolos de solubilização das proteínas espermáticas em amostras de sêmen convencional: 1) Nonidet P-40, 2) RIPA modificado; 3) uréia e tiouréia, associados ou não a congelação e descongelação das amostras em nitrogênio líquido e sonicação. O protocolo que separar um maior número de spots será selecionado para a preparação das amostras de sêmen sexado. Serão utilizadas doses comerciais de espermatozoides sexados para a separação por eletroforese 2D-DIGE utilizando-se as sondas Cy2, Cy3 e Cy5. Os spots diferenciais serão excisados dos géis para espectrometria de massa e inoculação em galinhas poedeiras, para produção de anticorpos a partir da gema de ovo. Os anticorpos serão purificados por cromatografia líquida e testados quanto à eficiência de ligação em 50% das células de um ejaculado não sexado utilizando-se a citometria de fluxo, a qual verificará a ligação do anticorpo anti-proteínas de interesse. (AU)

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
SCOTT, CAROLINE; DE SOUZA, FABIANA F.; ARISTIZABAL, VIVIANA H. V.; HETHRINGTON, LOUISE; KRISP, CHRISTOPH; MOLLOY, MARK; BAKER, MARK A.; DELL'AQUA JUNIOR, JOSE ANTONIO. Proteomic profile of sex-sorted bull sperm evaluated by SWATH-MS analysis. Animal Reproduction Science, v. 198, p. 121-128, . (13/23351-3, 15/25638-3, 15/25698-6)

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