Caracterização do potencial de inibição do receptor de colágeno receptor do domínio de Discoidina 2 por componentes de metaloproteinases de venenos de cobra

Resumo

Metaloproteases de veneno de cobra (SVMPs) são uma classe de proteínas de veneno de cobra que apresentam várias funções biológicas tais como a inibição da agregação plaquetária e adesão celular dependente da integrina por ligação ao colagénio e integrinas. Semelhante às integrinas, os Receptores de Domínio de Discoidina (DDR) são conhecidos por se ligarem e serem ativados por colágeno. Além disso, já foram descritos que o DDR aumenta a secreção de metaloprotease e são responsáveis por mediar o rearranjo de colagénio. Os DDRs são membros da família de receptores de tirosina quinase e muita atenção tem sido dada a esses receptores devido às recentes descobertas de sua potencial implicação em várias doenças incluindo a fibrose e câncer. Embora alguns trabalhos foram capazes de caracterizar as propriedades de ligação deste receptor com o colágeno e mapear alguns dos componentes da rede de ativação, ainda pouco se sabe sobre os mecanismos e função desse receptor. Neste projeto proponho testar os efeitos de duas SVMPs sobre o DDR2. Estas SVMPs apresentam diferentes potências hemorrágicas: o HF3 e a botropasina, bem como a região hipervariável (HVR) do domínio rico em cisteína de HF3, que é um péptido derivado da HF3 e conhecido por também apresentar propriedades hemorrágicas. Os efeitos sobre diversos modelos e linhagens de células de câncer sobre expressando DDR2 serão monitorados, e a ativação do receptor e a fosforilação dos componentes de sinalização serão caracterizados por espectrometria de massas usando a metodologia Selective Reaction Monitoring (SRM) e a internalização ou clivagem do receptor serão analisados por microscopia de fluorescência. (AU)