Avaliação do comportamento celular e da resposta do tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos isogênicos induzidas por cimentos endodônticosndodônticos

Resumo

O objetivo deste estudo será avaliar o comportamento celular e a resposta do tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos isogênicos, induzidas pelos cimentos endodônticos Real Seal XT1 e Sealapex Xpress. A viabilidade e proliferação celular serão avaliadas após exposição das células aos cimentos Sealapex Spress (grupo I) e Real Seal XT1 (grupo II). Como controle, as células serão expostas à endotoxina bacteriana (LPS) (Grupo III) e ao meio de cultura DMEM-c (Grupo IV). A viabilidade celular da suspensão de macrófagos da linhagem RAW 264.7 será avaliada nos diferentes grupos pelo ensaio colorimétrico MTT (Sigma). A viabilidade celular nos grupos I e II será expressa em porcentagem e comparada aos grupos III e IV (controles). A proliferação celular será determinada por imunomarcação ao antígeno nuclear Ki-67, expresso apenas por células durante o ciclo celular e não por células em fase G0. O resultado será expresso como o número total de células por poço. A proporção de células que exibirem alterações na membrana citoplasmática será determinada por citometria de fluxo de 1 a 10 dias. As leituras serão realizadas em citômetro de fluxo e a apoptose será expressa em porcentagem, em comparação aos grupos III e IV. Para análise da resposta em tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos isogênicos serão confeccionadas matrizes de Teflon para a obtenção de corpos de prova dos materiais obturadores, os quais serão introduzidos na região lombar de cada animal, no interior do tecido conjuntivo subcutâneo. Serão utilizados 70 camundongos isogênicos da linhagem BALB/c, machos, com 6 a 8 semanas de idade, pesando de 15 a 20 gramas, os quais serão divididos em 8 grupos (experimentais e controles). Ao final de cada um dos períodos experimentais (7, 21 e 63 dias), será retirada uma porção do tecido conjuntivo subcutâneo e este será submetido ao processamento histotécnico de rotina. No tecido periférico ao material testado, será observada a densidade numérica de células inflamatórias e será realizado o teste de imunohistoquímica para detecção de interleucina-6, além de possíveis fenômenos eventualmente encontrados. Os dados numéricos serão analisados utilizando o teste adequado de acordo com a natureza dos dados obtidos. O nível de significância adotado será de 0,05.