Análise proteômica da membrana celular de fibroblastos gengivais humanos cultivados sobre diferentes superfícies de titânio e avaliação do uso de antioxidante exógeno para controle do estresse oxidativo celular

Resumo

Tratamentos de superfície são aplicados em implantes dentais com o intuito de modificar estas superfícies aumentando a rugosidade e otimizar a osseointegração. Em que pese o sucesso clínico alcançado com estas modificações é comum a ocorrência de reabsorção óssea cervical, também denominada saucerização óssea, que expoe a região cervical do implante ao tecido conjuntivo do tecido gengival. Essa condição pode permitir o movimento de bactérias e toxinas da cavidade bucal para o tecido ósseo e dessa forma adesão entre tecido gengival e superfície dos implantes para formar uma barreira é de extrema importância para o sucesso da osseointegração. Até o presente, a influência da rugosidade na adesão de fibroblastos gengivais não foi investigada pelas técnicas mais recentes de análise proteômica. Sabe-se também, que nanopartículas de titânio podem ser liberadas nesta região após a inserção do implante, as quais têm potencial citotóxico pelo desencadeamento de estresse oxidativo nas células e assim modular processo de inflamação. Neste contexto, a administração de antioxidantes naturais, como a procianidina, comumente encontradas em diversos alimentos, pode estimular a bioatividade celular atenuando o processo inflamatório quando em contato com nanopartículas de titânio. Assim, o objetivo deste trabalho será avaliar a influência da rugosidade de superfície do titânio na expressão de proteínas de membrana celular de fibroblastos gengivais humanos através da análise proteômica, assim como avaliar o potencial oxidativo de partículas de titânio em células do tecido gengival. Células primárias de fibroblastos gengivais humanos serão cultivadas sobre discos de titânio comercialmente puro grau 4 (12,7 × 2 mm) com superfície minimamente rugosa, moderadamente rugosa e rugosa. Após 4, 12 e 24 h de cultivo, as células serão coletadas e as proteínas da membrana celular extraídas utilizando um kit cormercial. As proteínas serão separadas por eletroforese em gel de poliacrilamida e os spots diferenciais referentes à cada superfície serão identificados por análise proteômica utilizando espectrômetro de massas in Tandem (LC-MS/MS). Nestes mesmos períodos, as células serão coradas para visualização por microscopia confocal a laser para correlacionar a morfologia celular com a expressão de proteínas de membrana. A avaliação do potencial inflamatório das partículas de titânio será realizada pelo ensaio de redução do composto diacetato de diclorofluorescina (DCFH-DA). Para avaliar o efeito de procianidina B2 como tratamento, será usado o ensaio de redução do sal de tetrazolium (MTS) e contagem celular com azul de tripano. (AU)