Regulação epigenética em células mesenquimais humanas.

Resumo

Nos últimos anos, estudos com o uso de células-tronco mesenquimais (MSCs) na terapia regenerativa têm trazido resultados promissores, embora ainda limitados. Alguns limites esbarram no conhecimento relativo da biologia básica destas células, inclusive no que se refere ao controle epigenético, no estado de indiferenciação e multipotencialidade celular. Dentre os vários mecanismos de controle epigenético, os processos de metilação e desmetilação do DNA, quer sejam globais ou em genes envolvidos na manutenção da indiferenciação e multipotencialidade celular, são extremamente relevantes dentro deste contexto. O entendimento desta dinâmica nestas células poderá contribuir para o avanço no conhecimento biológico do que se conhece como saúde e desenvolvimento humano e ainda ser usado no processo de regeneração celular e tecidual. Para investigar esta dinâmica, serão utilizadas MSCs humanas indiferenciadas derivadas da medula óssea e do ligamento periodontal, dois tipos de meios, um com soro fetal bovino e outro sem, complementado com substituto do soro. A relação entre as enzimas envolvidas na metilação e desmetilação do DNA, Dnmt1/Dnmt3a/Dnmt3b e TETs respectivamente, e alguns genes que codificam fatores de transcrição como o Oct4 e Nanog, envolvidos na manutenção da indiferenciação e multipotencialidade celular, serão estudados in vitro. Para tanto, a small molecule RG108, um agente inibidor de Dnmt1, será utilizado. Diferentes técnicas que proporcionam o perfil de metilação do DNA, quer seja global ou gene específico, expressão gênica e proteica, atividade enzimática, além de análises de multipotencialidade, indiferenciação, proliferação, viabilidade e morte celular servirão ao propósito do projeto.