Investigação microbiológica da atividade endotóxica do LPS de Porphyromonas gingivalis quando presente em uma comunidade bacteriana

Resumo

Lipopolissacarídeos (LPS) são mediadores chave da inflamação. Devido a sua habilidade em ativar o sistema de defesa inata do hospedeiro, tem sido considerada uma importante molécula capaz de alertar o sistema imune sobre o potencial de infecção bacteriana. Embora seja uma molécula altamente conservada, LPS contém importantes diferenças estruturais entre diferentes espécies bacterianas que podem alterar significativamente as respostas do hospedeiro. Por exemplo, LPS isolado de Porphyromonas gingivalis, um agente etiológico da periodontite apical, é capaz de evocar uma resposta incomum por parte do hospedeiro, por ligar-se a receptores do tipo TLR-2 e não TLR-4, como convencionalmente ocorre com outras espécies bacterianas. Considerando que o LPS é um ligante chave para o sistema de defesa do hospedeiro, as propriedades incomuns do LPS de P. gingivalis estão associadas com papel da bactéria na patogênese da periodontite apical. Os objetivos deste estudo são: 1) Investigar a presença da bactéria-alvo, P. gingivalis, em amostras coletadas de canais radiculares com infecção endodôntica primária e correlacionar sua presença com as características clínico-radiográficas de origem endodôntica; 2) Isolar LPS de P. gingivalis e avaliar seu potencial inflamatório em cultura de células quanto à produção de citocinas pró-inflamatórias; 3) Comparar a resposta inflamatória induzida entre LPS extraídos de P. gingivalis provenientes de amostras do canal radicular e LPS extraídos de P. gingivalis ATCC 33277 (American Type Culture Collection). Amostras microbiológicas serão coletadas de 10 canais radiculares com necrose pulpar e periodontite apical, utilizando cones de papéis estéreis/apirogênicos. Cultura microbiológica e Técnica de reação em cadeia da polymerase (16S rDNA) serão utilizadas para investigação bacteriana. Extração de LPS será realizado pela Técnica de MgCl2-etanol (EtOH) frio seguido de extração de lipídios e conversão de sais de sódio. Dosagem de citocinas pró-inflamatórias - IL-1 ² e TNF-± - será realizada através do ensaio imunoenzimático (ELISA). Os dados serão analisados estatisticamente pelo programa SPSS 19,0 (SPSS Inc, Chicago, IL, EUA).Palavras-chave: Bactérias, LPS, citocinas, P. gingivalis (AU)