Atividades metabólicas e endócrinas de adipócitos extraídos do tecido adiposo sucutâneo e visceral de animais obesos induzidos por dieta hiperlipídica e suplementados com ácidos graxos ômega-3

Resumo

RESUMOA obesidade é resultado de um desequilíbrio crônico entre a ingestão e o gasto de energia que leva ao armazenamento cumulativo de gordura, tanto em depósitos subcutâneos, quanto em depósitos adiposos viscerais. As morbidades associadas à obesidade estão bem descritos e incluem dislipidemia, resistência à insulina, diabetes mellitus do tipo 2 (DM2), hipertensão e doença cardiovascular, o que contribui para o aumento da mortalidade. A expansão do tecido adiposo observado na obesidade surge do aumento no tamanho (hipertrofia) e no número (hiperplasia) de adipócitos. Adipócitos maduros secretam adipocinas, tais como leptina, adiponectina, resistina, PAI-1, IL-6, MCP-1 e TNF-±. A elevada produção de algumas citocinas, é seguramente o componente mais importante na obesidade, estando esta associada a um quadro de inflamação crônica e de baixo grau, que predispõe à resistência à insulina e ao desenvolvimento do diabetes mellitus tipo 2 e aumento do risco cardiovascular. Este projeto tem como objetivo determinar o efeito do ácido graxo saturado (ácido palmítico [PA, C16:0]) e poli insaturado (ácido docosa-hexaenoico [DHA, C22:6 n-3] sobre a expressão de adipocinas em cultura primária de células oriundas do estroma vascular do tecido adiposo subcutaneo e visceral. Propõe-se uma análise da resposta diferencial entre os dois coxins adiposos, partindo-se de células mesenquimais multipotentes presentes nestes depósitos, que posteriormente à sua retirada serão direcionadas (in vitro) à diferenciação em adipócitos. Para tanto, tecido adiposo subcutâneo (região inguinal) e visceral (região epididimal) serão retirados de camundongos Swiss, para isolamento das células do estroma vascular. Estas células serão cultivadas em DMEM até a confluência; a diferenciação será induzida pela adição de um coquetel adipogênico por 48 h. Após 8 dias de diferenciação, os adipócitos serão tratados com os referidos ácidos graxos, por mais 24h. As células serão empregadas para estudos de citotoxicidade dos ácidos graxos por citometria de fluxo (a fim de se determinar as concentrações ideais para este modelo), e para os estudos de expressão das adipocinas e proteínas (inflamatórias e da via de sinalização da insulina) tais como a leptina, adiponectina, resistina, PAI-1, IL-6, MCP-1, IL-10, IL-1², e TNF-±; JNK, IKK-², PKC, IRS-1, AKT, IR² e GLUT4) por RT-PCR em tempo real e/ou ensaio imunoenzimático e/ou western blotting.