Resistência à insulina e a regulação central da reatividade brônquica

Resumo

A obesidade é considerada importante fator de risco para o desenvolvimento da asma. Animais obesos apresentam hiperreatividade brônquica, a qual ocorre de forma independente do quadro inflamatório. Nossos dados preliminares indicam que brônquios de camundongos obesos apresentam maior resposta contrátil in vitro, sendo normalizada pela sensibilização à insulina após tratamento crônico com metformina. Além disso, recente trabalho mostra que a insulina inibe neurônios parassimpáticos no tronco encefálico, os quais inervam o sistema gastrintestinal, regulando desta forma a motilidade gástrica. O objetivo do presente projeto é avaliar o papel da insulina como moduladora central da atividade colinérgica que regula a reatividade muscular brônquica e o possível envolvimento deste mecanismo na hiperreatividade brônquica em animais obesos resistentes a insulina. Para tanto, realizaremos estudos funcionais in vitro (curvas de concentração-resposta) e in vivo (estudo de resistência pulmonar). No segundo, os animais sofrerão previa canulação intracerebroventricular (ICV) e serão submetidos aos estudos de mecânica pulmonar (técnica de oscilações forçadas e pletismografia), sendo desafiados com metacolina em diferentes concentrações, na presença e na ausência de insulina previamente administrada via ICV, bem como de inibidores da via da PI3kinase/AKT ou MAPK. Será realizado western blot, em células neuronais colinérgicas do núcleo ambíguo (NA) em cultura primária, para as proteínas da via da PI3K/AKT e da MAPK. A medida da variação de Ca2+ citosólico por fluorescência também será conduzida nestas células, onde serão aplicados estímulos com insulina na ausência e na presença de inibidores das vias da PI3K e MAPK. Animais obesos e controle tratados com metformina ou mutantes com perda da função dos receptores Toll Like Receptor 4 (TLR4) serão também estudados a fim de se avaliar o efeito da sensibilização à insulina central sobre a hiperreatividade brônquica em camundongos obesos, bem como para se determinar o papel dos receptores TLR4 na fisiopatologia desta disfunção.