Atuação da caseína-quinase II na repressão catabólica de carbono (CCR) em Trichoderma reesei (Hypocrea jecorina)

Resumo

A bioprodução de etanol a partir de materiais lignocelulósicos é de interesse nacional, sendo necessária a utilização de linhagens microbianas capazes de não somente fermentar os principais açúcares, mas também realizar a hidrólise enzimática de polímeros de carboidratos. Polissacarídeos presentes nestes materiais lignocelulósicos são matérias-primas para produção de etanol de segunda geração, devido à sua grande disponibilidade e riqueza em açúcares. A celulose é um dos três principais componentes da biomassa lignocelulósica, juntamente com hemicelulose e lignina. Trichoderma reesei (anamorfo de Hypocrea jecorina) é conhecido por sua elevada capacidade de secreção de enzimas celulases, que atuam na hidrólise da celulose, sendo esse um ponto chave na produção de bioetanol. A hidrólise da celulose resulta na liberação de moléculas de glicose que podem causar repressão catabólica, isto é, na presença de glicose, uma fonte de carbono prontamente metabolizável, diminui-se a expressão de genes necessários para a utilização de outras fontes de carbono alternativas, CRE1 é uma fosfoproteína responsável pela repressão em presença de glicose, diminuindo a expressão de genes de celulases. Para que CRE1 exerça tal função, esta deve ser fosforilada, sendo provável que a proteína, caseína-quinase II, fosforile CRE1 afetando a repressão catabólica. Os objetivos deste projeto serão: avaliar a atuação da caseína-quinase II na repressão catabólica de carbono em Trichoderma reesei pela deleção nos genes codificadores de caseína-quinase II; analisar a expressão dos genes de celulase por PCR em Tempo Real; verificar a interação entre CRE1 em seu estado fosforilado e regiões promotoras de genes que codificam para celulases pelo ensaio de retardamento em gel ou EMSA (Eletrophoretic Mobility Assay). O novo mutante reprimido catabolicamente obtido poderá ser utilizado na hidrólise de biomassa vegetal contribuindo para os estudos que envolvem a produção de biocombustíveis.