Pesquisa de mutações nos genes PTGDS, MAP3K1, FGF9/FGFR2 da alça de amplificação do gene SOX9 em pacientes portadores de disgenesia gonadal 46,XY

Resumo

Nos mamíferos o gene Sox9 tem um papel preponderante no processo de desenvolvimento da gônada embrionária masculina, fato que é evidenciado pela existência de diversos mecanismos de amplificação da alça de retrocontrole positivo do Sox9. Os genes Ptgds, Map3k1, Fgf9 e seu receptor Fgfr2 participam do processo de sustentação da via masculina do desenvolvimento gonadal, via amplificação do Sox9. As diversas evidências experimentais da participação desses genes no processo do desenvolvimento da gônada masculina sugerem que a disfunção destes, causaria anormalidades na dinâmica da determinação testicular e o provável desenvolvimento de gônadas disgenéticas. A existência da amplificação da retroalimentação entre os genes Sox9 e L-Pgds foi confirmada por estudos em modelos animais, porém até o momento, nenhuma mutação em humanos foi descrita. Recentemente, mutações no gene MAP3K1 foram descritas em pacientes não sindrômicos com disgenesia gonadal 46,XY. O estudo funcional das proteínas MAP3K1 mutadas identificou alteração na fosforilação de alvos abaixo da cascata como p38 e ERK1/2 e um aumento de ligação da proteína RHOA ao complexo MAP3K. Em modelos animais, a presença de anomalias no desenvolvimento gonadal foi relacionada à perda de função dos genes Fgf9 e Fgfr2. Estes relatos motivaram a pesquisa de mutações inativadoras em ambos os genes em pacientes com disgenesia gonadal 46,XY desenvolvida como dissertação de mestrado. Como resultado desta pesquisa, uma nova variante, c.1358 C>T (p.Ser453Leu), localizada no exon 10 do FGFR2 foi identificada em heterozigose em duas irmãs com DGP 46,XY e na mãe. Esta variante não foi encontrada em 147 indivíduos 46,XY controles estudados. O objetivo deste projeto é avaliar a participação dos genes PTGDS, MAP3K1 e FGF9/FGFR2, envolvidos na via de retrocontrole positivo do SOX9, no desenvolvimento testicular anormal de pacientes portadores de DDS 46,XY. A presença de mutações nos genes PTGDS e MAP3K1 será pesquisada em 33 pacientes portadores de DDS 46,XY por anormalidades no desenvolvimento gonadal nos quais os genes FGF9 e FGFR2 já foram estudados. O estudo funcional da nova variante alélica p.Ser453Leu do FGFR2 identificada no estudo prévio será realizado em colaboração com o Prof. Dr. Vincent Harley do Prince Henry´s Institute em Melbourne na Austrália. Este estudo compreenderá a análise "in vivo" e "in vitro" do FGFR2 mutado. As possíveis repercussões nas atividades celulares de apoptose no tecido gonadal, secundárias às modificações estruturais e conformacionais da nova proteína FGFR2, serão avaliadas por estudos histológicos dos tecidos parafinizados das pacientes portadoras da variante alélica utilizando-se imunohistoquímica com anticorpos anti-caspase 3 e a técnica de TUNEL.