Investigação das propriedades pro-inflamatórias do TNF-alfa e do heme em leucócitos in vitro e in vivo.

Resumo

Durante a resposta inflamatória, os neutrófilos e outros leucócitos aderem ao endotélio, deixando os vasos sanguíneos e movimentando ativamente em direção ao foco inflamatório. No momento, mecanismos inflamatórios específicos que atuam nas propriedades adesivas de neutrófilos ainda não estão completamente descritos. Usando um modelo de ativação de neutrófilos pelo TNF-±, uma potente citocina inflamatória, que induz uma ampla adesão, propomos investigar os mecanismos e vias de sinalização que intermedeiam alterações nas funções adesivas dos neutrófilos. Investigaremos o papel do fator de transcrição, NFºB, neste mecanismo e sugerimos a hipótese que proteínas celulares denominadas Rho GTPases possam estar envolvidas na via de sinalização destas células após a sua ativação frente o estímulo inflamatório promovido pelo TNF-±. Em paralelo a este objetivo, também estudaremos os efeitos da sinvastatina, uma droga da classe das estatinas, visando à identificação de novos alvos terapêuticos para o desenvolvimento de agentes anti-inflamatórios. Resultados obtidos pela nossa equipe de trabalho sugerem que sinvastatina pode inibir diretamente a ativação dos neutrófilos; novos estudos serão realizados a fim de entender melhor o efeito desta droga na modulação das propriedades adesivas de neutrófilos. Deste modo, este trabalho pretende investigar as vias de sinalização envolvidas no mecanismo adesivo de neutrófilos sob condição de inflamação. Para o desenvolvimento deste trabalho serão realizados estudos in vitro e in vivo, utilizando ensaios de adesão em fluxo (com sistema de microfluidos), citometria de fluxo, avaliação da atividade das proteínas citoplasmáticas envolvidas em mudanças do citoesqueleto, ELISA, real time PCR, microscopia confocal e microscopia intravital, além da análise estatística dos resultados obtidos. Esperamos através desta pesquisa, que nossos resultados possam contribuir para um melhor esclarecimento do comportamento dos neutrófilos durante um processo inflamatório estabelecido. Um melhor conhecimento destas vias de sinalização pode ser importante para indicar alvos terapêuticos para doenças de quais a fisiopatologia é caracterizada por inflamação ou inflamação vascular crônica.