Estratégias para minimização do estresse oxidativo em sistemas de produção in vitro de embriões bovinos destinados à vitrificação

Resumo

Uma vez que embriões bovinos produzidos in vitro são mais susceptíveis aos danos oxidativos, a suplementação com antioxidantes tem se mostrado eficiente para melhorar a qualidade embrionária. Além destes, outros fatores já demonstraram desempenhar importante papel no desenvolvimento embrionário em condições adversas, como por exemplo, fatores de crescimento. Visando melhorar a qualidade, o potencial de desenvolvimento e o sucesso da criopreservação de embriões bovinos, este estudo tem como principal objetivo promover modificações em algumas etapas do sistema de produção in vitro para minimizar os danos decorrentes do estresse oxidativo. Para tanto, em uma primeira etapa (Experimento I), os oócitos serão maturados in vitro em meio TCM-199 Bicarbonato (B-199) suplementado com 0,6 mM de cisteína associado à 100 µM de cisteamina (C+C), 100 UI de catalase (CAT) ou 0,6 mM de cisteína associado à 100 µM de cisteamina e à 100 UI de catalase (C+C+CAT), ou ainda sem suplementação com antioxidantes (Controle) e serão avaliados quanto à competência e qualidade oocitária. O grupo experimental que proporcionar os melhores resultados (qualidade de oócitos e posterior desenvolvimento embrionário) será utilizado nos experimentos subsequentes. No Experimento II, serão avaliados os efeitos da suplementação com fatores de crescimento e/ou citocinas durante o CIV em situação geradora de estresse oxidativo (na presença de menadiona), sobre o desenvolvimento e potencial oxidativo de embriões bovinos produzidos in vitro. Para tanto, oócitos serão maturados in vitro em meio pré-definido no experimento I e os prováveis zigotos serão CIV em meio SOF suplementado com 100 ng/mL de IGF-I (IGF-I) na presença ou ausência de 1 µM de menadiona. Os embriões serão avaliados quanto a sua qualidade (níveis de GSH, presença de ROS ou taxa de apoptose) e os grupos que proporcionarem os resultados mais promissores serão utilizados no Experimento III, quando serão avaliados os efeitos da adição de antioxidantes durante a MIV associada à suplementação com IGF-I durante o CIV sobre o desenvolvimento e criotolerância embrionárias, bem como o padrão de expressão gênica. Para tanto, oócitos serão maturados in vitro em meio pré-definido no Experimento I e os zigotos serão CIV nas condições definidas no Experimento II, na presença ou ausência de menadiona. Os blastocistos obtidos serão destinados à vitrificação ou avaliação da expressão dos genes Bcl-2, BAX, GPX e MnSOD.