Estudo de Letalidade Sintética em células transformadas por papilomavírus humano (HPV)

Resumo

A infecção persistente por papilomavírus humano (HPV) de alto risco oncogênico está associada à quase a totalidade dos cânceres da cérvice uterina e a mais de 50% de outros cânceres anogenitais. A infecção por estes tipos de vírus tem sido associada à presença de instabilidade genômica, uma característica comum à maioria dos cânceres humanos. Os HPV de alto risco expressam duas oncoproteínas, E6 e E7, que agem sobre fatores celulares específicos promovendo proliferação celular. Estas proteínas são capazes de induzir alterações cromossômicas numéricas e estruturais. Além disso, podem modular a resposta da célula à presença de dano no DNA. A letalidade sintética descreve uma condição celular na que duas (ou mais) mutações não alélicas e não essenciais, que não são letais individualmente, se tornam mortais quando presentes na mesma célula. Células transformadas por HPV de alto risco constituem modelos de particular interesse para o estudo de letalidade sintética, uma vez que as oncoproteínas E6 e E7 agem em várias vias de transdução de sinal, como por exemplo, as reguladas por p53 e pRb. Neste estudo analisaremos a viabilidade de linhagens celulares transformadas por HPV16 e HPV18 (SiHa, CasKi, HeLa) após inibição sistemática de genes envolvidos nos sistemas de reparo de dano ao DNA e genes supressores de tumor. Para isto utilizaremos bibliotecas de lentivírus que expressam shRNA específicos. Além disso, estudaremos o efeito de drogas inibidoras dos diferentes sistemas de reparo de dano ao DNA ou causadoras de dano ao DNA na proliferação e viabilidade destas células. Os resultados serão validados em culturas organotípicas de queratinócitos que expressem diferentes genes virais visando determinar o envolvimento das diferentes oncoproteínas virais no efeito observado. Nossa abordagem poderá contribuir à identificação de genes essências para a sobrevivência de células transformadas por HPV. Mais ainda, poderá abrir possibilidades para desenvolver novas estratégias para o tratamento de lesões associadas a este vírus. (AU)