Caracterização funcional de RNAs longos não codificadores envolvidos na ativação de genes regulados por andrógeno

Resumo

Trabalhos da última década têm revelado que uma porção significativa das mensagens transcritas em humanos é composta por RNAs não codificadores (ncRNA). Uma subclasse destes RNAs, denominada ncRNAs longos (lncRNAs), mapeia em regiões intrônicas e intergênicas, tendo sido demonstrado que possuem uma função regulatória na expressão gênica em situações normais e patológicas. De maneira geral, sua função regulatória envolve interações com complexos proteicos, especialmente complexos remodeladores da cromatina. Neste projeto, pretende-se caracterizar funcionalmente o envolvimento de lncRNAs na ativação da expressão gênica mediante estímulo do hormônio andrógeno, através de mecanismos epigenéticos. Já foi descrito que as demetilases JMJD2C e LSD1 interagem simultaneamente com o receptor de andrógeno, formando um complexo LSD1/JMJD2C/AR, e este complexo ativa a transcrição de genes andrógeno-dependente através da desmetilação do resíduo de lisina 9 da histona 3. Será caracterizado inicialmente um lncRNA intergênico (lincRNA), a montante do gene PSA, identificado por nosso grupo como expresso em LNCaP, regulado por andrógeno e ainda não caracterizado, denominado lincRNA-PSA. Faremos um estudo detalhado do possível envolvimento desse lincRNA-PSA no recrutamento do complexo JMJD2C/LSD1/AR para seu alvo (região promotora e enhancer do gene PSA), o que promoveria a ativação da transcrição de PSA. Em paralelo, mutantes de deleção do lincRNA-PSA e/ou PAR-CLIP (Photoactivatable-Ribonucleoside-Enhanced Crosslinking and Immunoprecipitation) serão usados para mapear as interações com seus alvos proteicos. Além disso, pretendemos identificar novos lncRNAs envolvidos nessa via epigenética de regulação por andrógeno. O conjunto de experimentos propostos pretende fornecer novas informações acerca dos mecanismos moleculares de regulação da expressão gênica envolvendo lncRNA, andrógeno e complexos remodeladores da cromatina.