Detecção e subgenotipagem de Cryptosporidium cuniculus em amostras fecais de coelhos por meio de PCR em tempo real e análise da curva de dissociação em alta resolução

Resumo

Cryptosporidium cuniculus foi originalmente detectado em coelhos e tem sido identificado como um patógeno humano. No entanto, a ocorrência, prevalência e a epidemiologia da criptosporidiose causada por C. cuniculus em populações humanas e em coelhos ainda são pouco estudadas. Como a identificação de C. cuniculus pode ser demorada e de alto custo usando ensaios de biologia molecular já existentes, como a nested PCR seguida de sequenciamento dos fragmentos amplificados, neste experimento será utilizada a PCR em tempo real, visando à amplificação de fragmentos do gene da glicoproteína gp60, específicos para os subtipos Va e Vb de C. cuniculus. A PCR em tempo real será realizada com o fluoróforo SYBR Green e dois conjuntos de oligonucleotídeos iniciadores, específicos para os subtipos pesquisados. Após o término da reação, o produto amplificado será submetido à análise da curva de dissociação em alta resolução (HRM). (AU)