O envolvimento do complexo adaptador AP-3 na secreção regulada em mastócitos

Resumo

Os mastócitos são células efetoras multifuncionais do sistema imune e participam das imunidades inata e adquirida, de processos inflamatórios, de reações alérgicas, do reparo tecidual e da angiogênese. Assim como neurônios, melanócitos, células endócrinas, exócrinas e outras células do sistema imune, os mastócitos são células secretoras especializadas com secreção regulada. A via de secreção regulada implica no direcionamento de proteínas para uma via específica, que tem como destino grânulos de secreção, os quais são secretados após estímulos fisiológicos adequados. A participação dos mastócitos nos diferentes processos fisiológicos e patológicos se dá através da secreção regulada de seus mediadores, em particular, de mediadores pré-formados estocados em seus grânulos secretores, que são considerados Lysosome-Related Organeles ou LROs, pois apresentam muitas características semelhantes aos lisossomos. A biogênese de LROs está relacionada com o sistema endolisossomal, onde o direcionamento de proteínas para essas organelas depende de sinais que dirigem a incorporação destas proteínas em vesículas de transporte. Nesse sistema, os complexos adaptadores APs além de conectarem coberturas, como a Clatrina, à membrana doadora, selecionam a carga e recrutam proteínas acessórias que regulam o brotamento e transporte vesicular. Em particular, o complexo adaptador AP-3 é reconhecido por ter um papel na formação de LROs como os melanossomos e os grânulos densos plaquetários. Acredita-se que AP-3 atue no tráfego de proteínas das vias endocítica e biosintética para endossomos tardios, lisossomos e/ou LROs. Defeitos genéticos na subunidade b3A de AP-3 causam a síndrome de Hermansky-Pudlak do tipo II (HPS2) em humanos, a qual é caracterizada por albinismo oculocutâneo, sangramento prolongado e deficiência na imunidade inata, que decorrem de anomalias na biogênese ou secreção de grânulos secretores por células especializadas. O presente estudo se propõe a investigar o envolvimento direto e indireto de AP-3 na biogênese dos grânulos secretores em mastócitos, especificamente, na segregação das proteínas nestes grânulos. Também será investigado o papel de AP-3 na fusão do grânulo com a membrana plasmática, após estímulo secretor. O envolvimento de AP-3 na secreção regulada em mastócitos será investigado através do uso de RNA de interferência em células da linhagem de mastócitos de rato RBL-2H3, onde serão avaliados os efeitos resultantes da ausência de AP-3 no tráfego e secreção de proteínas granulares, bem como possíveis efeitos indiretos sobre a secreção de mediadores lipídicos e neo-sintetizados. Nossos achados irão contribuir para elucidar o papel de AP-3 na secreção regulada nos mastócitos e poderão esclarecer o envolvimento dos mastócitos nos sintomas observados na HPS2. O conhecimento dos mecanismos moleculares envolvidos na biogênese e exocitose dos grânulos de mastócitos é de suma importância, uma vez que, os mediadores contidos nestes grânulos estão envolvidos em processos inflamatórios e patológicos.