Geração de proteínas recombinantes em Pichia pastoris baseadas nas diferentes formas do antígeno circumsporozoíta de Plasmodium vivax visando o desenvolvimento de uma vacina universal contra malária

Resumo

O P. vivax é a segunda mais prevalente espécie causadora de malária no mundo. Dados recentes estimam que ocorra de 132-391 milhões de casos anualmente. Nas Américas, o P. vivax é responsável por mais de 70% dos casos de malária sendo considerada como a espécie mais prevalente de plasmódio. A relativa ineficiência das medidas de controle atualmente empregadas exige o desenvolvimento de novas estratégias de prevenção, como vacinas, novas drogas e novos inseticidas. Apesar de uma constante e crescente atividade de pesquisa, ainda não existe uma vacina capaz de impedir a infecção pelo Plasmodium spp. Entretanto, estudos experimentais e testes clínicos recentes sugerem que a indução de uma imunidade protetora contra as formas pré-eritrocíticas da malária é um objetivo tangível. Como exepmplo podemos citar que: i) imunizações com formas esporozoítas irradiadas são capazes de induzir proteção assintomática em diversos hospedeiro inclusive o homem, ii) vacinações experimentais em modelos de infecções murinas demonstraram que compostos sintéticos e/ou recombinantes baseados na proteína do circumsporozoíta (CS) são capazes de gerar potente imunidade protetora contra o desafio com esporozoítas de P. berghei ou P. yoelli; iii) vacinações em crianças com uma proteína recombinante baseada na proteína CS de P. falciparum induziu significativo grau de proteção contra a exposição natural a malária. Assim, será o objetivo deste projeto a geração de proteínas recombinantes baseadas nas sequências primárias das proteínas CS expressas por formas pré-eritrocíticas de diferentes variantes de P. vivax. Estas proteínas serão produzidas em sistema de expressão em Pichia pastoris, purificadas e utilizadas para ensaios de imunizações experimentais em modelos animais. Tentaremos gerar três proteínas contendo cada uma das três regiões imunodominantes repetidas e uma quarta contendo todas as três regiões em fusão num mesmo polipeptídeo. As proteínas serão injetadas em camundongos na presença de diferentes formulações de adjuvantes baseadas em nossa experiência anterior com vacinações experimentais com proteínas recombinantes. A comparação da resposta imune será feita entre animais que receberam simultaneamente as três proteínas recombinantes representando cada forma do antígeno, com animais que receberam somente uma proteína contendo as três regiões em fusão. Ao final deste projeto esperamos ter do ponto de vista aplicado, uma ou mais proteínas recombinantes que possam servir para futuras imunizações clínicas nos testes de uma vacina contra a malária causada pelo P. vivax. Do ponto de vista da geração de conhecimento básico pretendemos responder a uma questão importante para o desenvolvimento de imunidade e vacinas: se é possível expressar simultaneamente três epítopos imunodominantes numa mesma proteína sem causar interferência na resposta imune de uma sobre a outra.