Caracterização do transcriptoma do músculo estriado esquelético do pacu (Piaractus mesopotamicus)

Resumo

O pacu (Piaractus mesopotamicus) apresenta excelentes características zootécnicas como rápido crescimento, parâmetro que está diretamente relacionado com o aumento da musculatura estriada esquelética. Pesquisas envolvendo a caracterização de genes musculares têm sido realizadas utilizando-se tecnologias moleculares, em espécies de peixes modelo como o Zebrafish que possuem o genoma sequenciado. No pacu, espécie que não possui o genoma sequenciado, esta falta de informação genética dificulta a realização de pesquisas relacionadas com a identificação das vias de sinalização que regulam o desenvolvimento, o crescimento e a manutenção do fenótipo muscular. A utilização de sequenciamento de próxima geração (Next-Generation Sequencing), como o pirosequenciamento Roche 454, é um método rápido, efetivo e com progressivo aumento da cobertura, para a obtenção de sequências dos genes transcritos (transcriptoma de novo) em espécies de peixes não modelo como o pacu. Esta tecnologia possibilita gerar uma sequência referência do transcriptoma para o estudo da expressão gênica global, identificação de duplicações de genes (parálogos), resultantes do evento de duplicação do genoma nas linhagens bases de teleósteos, e polimorfismos de base única (SNPs) falsos e verdadeiros, além de permitir futuros sequenciamentos de transcriptomas e genomas da espécie e de outras filogeneticamente relacionadas. Neste trabalho, pretende-se: 1)sequenciar e caracterizar o transcriptoma na musculatura do pacu utilizando o pirosequenciamento Roche 454 para produzir uma sequência referência do transcriptoma; 2) Determinar os genes diferencialmente expressos responsáveis pelo controle do fenótipo muscular vermelho e branco; 3) Quantificar (validar) a expressão dos genes relevantes para o fenótipo muscular utilizando a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase Quantitativa após transcrição reversa (RT-qPCR). Os resultados obtidos com este projeto possibilitarão estabelecer uma base sólida para estudos futuros do músculo esquelético em espécies brasileiras de importância econômica na aquicultura, em diferentes condições experimentais.