Clonagem, expressão e purificação da proteína Tex de Xanthomonas citri subsp. Citri

Resumo

O Brasil é o maior produtor mundial de laranja e de suco de laranja concentrado, com o estado de São Paulo sendo o responsável por 80% da produção nacional do fruto e 98% da produção de suco concentrado. Portanto, a citricultura representa uma atividade muito importante para o país, principalmente para o estado de São Paulo. Um dos grandes problemas da citricultura são as doenças que acatam os citros. Dentre elas destacam-se o cancro cítrico, doença causada pela bactéria Xanthomonas citri subsp. citri (Xac). Para esta doença não há um controle efetivo e a maneira mais eficiente de eliminá-la de um pomar é por meio da erradicação das plantas doentes e suspeitas. O sequenciamento do genoma da Xac possibilitou o uso de plataformas de genômica funcional para a caracterização dos genes envolvidos nos processos de virulência e patogenicidade. O entendimento dos mecanismos envolvidos na interação Xac-citros é fundamental para o desenvolvimento de estratégias que levem ao controle do cancro cítrico. Em um estudo anterior conduzido no nosso laboratório a disrupção da ORF XAC2053 de Xac (gene tex) por mutagênese com o transposon Tn5 aboliu os sintomas de cancro, em contraste com a linhagem selvagem, que levou ao desenvolvimento da doença. O presente trabalho tem como objetivo clonar, expressar em E. coli e purificar a proteína Tex de Xac. A proteína recombinante purificada será utilizada posteriormente em estudos estruturais e funcionais, tal como a sua cristalização e difração do cristal por raios-X, etapa fundamental para a elucidação da sua estrutura tridimensional. (AU)