Bolsa 12/01998-2 - Células-tronco, Marcador molecular - BV FAPESP
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Análise da expressão de diferentes marcadores moleculares em células-tronco espermatogoniais bovinas

Processo: 12/01998-2
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Data de Início da vigência: 01 de abril de 2012
Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2012
Área de conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Pesquisador responsável:José Antonio Visintin
Beneficiário:Alexandre Hinkelmann Bruno
Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Células-tronco   Marcador molecular   Espermatogônias
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:Análise | bovino | Células-tronco | Espermatogoniais | marcadores | Célula-tronco espermatogonial bovina

Resumo

Células-tronco espermatogoniais (SSCs - "Spermatogonial Stem Cells") são células indiferenciadas que podem se replicar ou se diferenciar, originando os espermatozoides através da espermatogênese. Dentre as aplicações práticas das SCC na biotecnologia tem se: recuperar a fertilidade de um animal que ficou estéril, permitir a transgenia, imortalizar a genética de um touro através do congelamento ou cultivo in vitro e aumentar e eficiência da reprodução. Genes específicos expressos pelas SSCs podem ser utilizados como marcadores moleculares, facilitando o isolamento e identificação celular, sendo esta técnica utilizada com sucesso em diversas espécies animais. Os marcadores moleculares são características expressas em determinadas células, que são reconhecidas por anticorpos específicos. O DBA é uma lectina que serve como marcador seletivo para o único precursor das espermatogônias bovinas. A ± 6 integrina é encontrada na superfície das células espermatogoniais. O SSEA4, até o momento, só foi utilizado como marcador molecular de SSCs humanas e de primatas.Para alcançar melhores resultados para os processos que envolvem as SSCs é de extrema importância desenvolver melhores métodos para isolamento, purificação e identificação das SSCs. A purificação por citometria de fluxo com separação celular é uma forma eficiente e rápida de obter estas células, porém este método é limitado pela falta de conhecimento sobre os marcadores de superfícies das SSCs bovinas. A quantidade de SSCs também difere conforme a idade do animal, diminuindo conforme a idade do animal avança. Assim, alguns marcadores têm suas expressões aumentadas ou diminuídas conforme a idade do animal.Portanto este estudo tem como objetivo avaliar e comparar a expressão de três marcadores moleculares para SSCs bovinas provenientes de testículos de animais pré-puberes (n=10) e adultos (entre 3 a 4 anos de idade, n=10). A expressão de ± 6 integrina e SSEA4 e a afinidade das SSCs pela lectina DBA será avaliada por citometria de fluxo e imunicitoquímica. Espera-se que haja maior expressão desses marcadores nas SSCs de animais pré-púberes do que nas SSCs de animais adultos, tanto por citometria de fluxo quanto por imunicitoquímica. Os resultados obtidos com a realização desse estudo serão complementares e de grande importância aos obtidos pelo nosso grupo de pesquisa, incrementando a compreensão da expressão um novo marcador molecular (SSEA4) apenas antes relatado em outras espécies que não a bovina. (AU)

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