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Ação da butirolactona I e da roscovitina na maturação de oócitos bovinos e suas implicações na resistência à criopreservação

Processo: 10/18994-4
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de novembro de 2011
Vigência (Término): 31 de janeiro de 2014
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Pesquisador responsável:Fernanda da Cruz Landim
Beneficiário:Rosiára Rosária Dias Maziero
Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
Assunto(s):Inibição   Maturação   Oócitos   Biotecnologia da reprodução   Criopreservação
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:butirolactona I | Criopreservação | Inibição | Maturação | oócitos | roscovitina | Biotecnologia da Reprodução

Resumo

Este trabalho tem como objetivo averiguar o efeito da butirolactona I e roscovitina para bloquear temporariamente a retomada da meiose, atuando sobre os fatores que controlam o ciclo celular meiótico de oócitos bovinos e a expansão das células do cumulus oophoros. Deste modo, este projeto parte da hipótese de que a adição destes fármacos durante a maturação oocitária influenciará positivamente a produção de embriões e que este efeito induzirá uma melhor resposta a vitrificação. Os diferentes grupos de oócitos serão avaliados quanto a: 1) maturação oocitária e expansão das células do cumulus; 2) expressão das proteínas do MPF (p3cdc2 e ciclina B1) e MAPK em oócitos; 2) capacidade dos oócitos submetidos ou não ao bloqueio da meiose pré-maturação em se desenvolver em embriões viáveis e 3) resistência a vitrificação dos embriões obtidos. Na parte I todos os oócitos de abatedouro serão maturados in vitro nos grupos: G1: Grupo controle; G2: Grupo tratado com butirolactona I por 12 horas; G3: Grupo tratado com BLI com por 24 horas; G4: Grupo tratado com roscovitina com por 12 horas; G5: Grupo tratado com roscovitina com por 24 horas; G6: Grupo tratado com a associação de BL I (100 µM) e ROS (25 µM) por 12 horas, seguida de 22 horas de MIV e G7: Grupo tratado com a associação de BL I (100 µM) e ROS (25 µM) por 24 horas, seguida de 22 horas de MIV. Serão produzidos embriões in vitro, a partir dos oócitos de todos os grupos, utilizando-se meio SOFaa acrescido por 5mg/mL de BSA e 2,5% de SFB, fertilizados e cultivados in vitro. No D7 será avaliada a taxa de formação de blastocisto, o índice de apoptose. Em seguida, os embriões do D7 produzidos serão vitrificados pelo método conhecido como "Cryotop" (Vitri-Ingá®, Ingamed). Após aquecimento os embriões serão então lavados e cultivados em meio SOFaa acrescido por 5mg/mL de BSA e 2,5% de SFB. O índice de apoptose será avaliado antes e após o processo de vitrificação/aquecimento. Na parte II será avaliado o efeito da adição dos fármacos na maturação in vitro (MIV) de oócitos bovinos de acordo com os grupos descritos na parte I, bem como a produção das proteínas ligadas ao MPF dos oócitos e a expansão das células do cumulus.

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
MAZIERO, ROSIARA ROSARIA DIAS; DE FREITAS GUAITOLINI, CARLOS RENATO; PASCHOAL, DANIELA MARTINS; CRESPILHO, ANDRE MACIEL; OLIVEIRA SESTARI, DANIELLE ANDRESSA; NUNES DODE, MARGOT ALVES; LANDIM-ALVARENGA, FERNANDA DA CRUZ. Effects of the addition of oocyte meiosis-inhibiting drugs on the expression of maturation-promoting factor components and organization of cytoplasmic organelles. REPRODUCTIVE BIOLOGY, v. 20, n. 1, p. 48-62, . (10/18994-4, 11/08926-4)
MAZIERO, ROSIARA ROSARIA DIAS; GUAITOLINI, CARLOS RENATO DE FREITAS; PASCHOAL, DANIELA MARTINS; CRESPILHO, ANDRE MACIEL; MONTEIRO, BIANCA ANDRIOLO; DE LIMA, JONATHAN SOARES; SESTARI, DANIELLE ANDRESSA OLIVEIRA; LANDIM-ALVARENGA, FERNANDA DA CRUZ. Treatment with roscovitine and butyrolactone I prior toin vitromaturation alters blastocyst production. ZYGOTE, v. 28, n. 1, p. 8-pg., . (10/18994-4, 11/08926-4)

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