CLONAGEM E CARACTERIZAÇÃO DE OXIDOESQUALENO CICLASES DE Maytenus ilicifolia Mart. ex Reissek

Resumo

Entre os metabólitos secundários produzidos pelas plantas, os isopenoides representam uma classe com diferentes estruturas químicas e variadas atividades biológicas e terapêuticas. Friedelina é um derivado triterpênico encontrado nas folhas de algumas espécies como Maytenus ilicifolia, que, além de apresentar atividades biológicas, também é precursor dos quinonametídeos triterpênicos maitenina e pristimerina, importantes marcadores da espécie e presentes em fitoterápicos utilizados no tratamento de desordens gástricas, mas produzidos apenas na casca da raiz da planta jovem. A partir da molécula de oxidoesqualeno, diferentes rotas biossintéticas resultam em esteroides das membranas de plantas, fungos e animais, hormônios em plantas e animais, ou derivados terpênicos secundários em plantas. No intuito de caracterizar as vias metabólicas secundárias de derivados terpênicos e controlar a sua produção, diversas espécies vegetais tiveram suas terpeno ciclases de metabolismo secundário clonadas. Uma alternativa muito importante para a produção de compostos secundários é a utilização de microrganismos geneticamente modificados. A utilização desses microrganismos modificados evita o extrativismo predatório, emprega menos solventes e, portanto, é uma prática de "química verde", possibilita o uso de uma fonte de produção renovável mais rápida que a planta, utiliza fontes de carbono baratas, permite a manipulação genética para aumento do rendimento e torna possível uma produção em larga escala. Desta forma, são objetivos deste projeto clonar o gene de friedelina sintase das folhas de M. ilicifolia e expressar em Saccharomyces cerevisiae geneticamente modificada para melhor produção do respectivo triterpeno. Assim, o projeto está estruturado de forma a ser desenvolvido em dois anos, iniciando pela adequação dos protocolos de clonagem e expressão de oxidoesqualeno ciclase de M. ilicifolia, avaliando a produção de friedelina e outros compostos por métodos cromatográficos, identificando a relação filogenética da enzima clonada, especificidade para o produto friedelina e mutações que possam resultar em melhores perfis de produção de friedelina.