Adaptação para cultivo em suspensão e meio de cultura livre de soro fetal bovino da linhagem celular 293-FIX-GFP para produção de FIX recombinante

Resumo

A produção de fator IX recombinante (FIX) em células de mamíferos representa uma alternativa segura para o tratamento de indivíduos portadores de Hemofilia A. Atualmente no Brasil, o tratamento destinado aos hemofílicos é realizado com fatores (VIII e IX) purificados a partir do plasma de indivíduos normais, estratégia que apresenta desvantagens como risco de infecções virais e alta demanda de plasma de doadores normais. Frente à necessidade de uma alternativa terapêutica de baixo custo e mais segura para o tratamento de portadores de Hemofilia, o objetivo principal deste projeto será adaptar a linhagem celular recombinante HEK-293-FIX-GFP para cultivos em suspensão e meio livre de soro fetal bovino de modo a estabelecer uma plataforma de produção de FIX que permita futuros escalonamentos. A adaptação para os meios livres de soro e a seleção do meio mais eficiente em termos de crescimento celular e produção de FIX será realizada em garrafas estáticas. O cultivo em frascos spinner será utilizado para adaptar a célula para o cultivo em suspensão. Após a adaptação para o cultivo em suspensão, serão realizados cultivos, também em frascos spinner, para caracterizar a cinética de crescimento celular e produção de FIX. Tais cinéticas serão comparadas às obtidas em culturas aderentes em meio contendo soro fetal bovino (DMEM 10%).