Identificação de espécies de Staphylococcus spp. isoladas de hemoculturas, gene mecA de resistência à oxacilina e dos genes icaA, icaD e icaC de produção de biofilme pela técnica de PCR multiplex

Resumo

Na ultima década houve uma clara mudança na etiologia das bacterimias. Dados do National Nosocomial Infeccion Study (NNIS) mostram que os cocos Gram-positivos aeróbios têm ultrapassado os bacilos Gram-negativos como os principais agentes etiológicos, onde os Staphylococcus coagulase negativa (SCN) se tornaram os 1º agentes isolados.Os SCN foram anteriormente considerados não patogênicos ou somente parte da microbiota normal da pele humana. Porém recentemente eles têm sido implicados em uma enorme variedade de infecções tanto em hospedeiros imunodebilitados quanto em pessoas saudáveis. Dentre os Staphylococcus spp. os mais comuns encontrados em hemoculturas são S. aureus, S. epidermidis e S. haemolyticus. O principal fator de virulência dos Staphylococcus spp. está associado à formação do biofilme que propicia a adesão destes as superfícies plásticas. A aderência é mediada por uma adesina intracelular polissacarídica (PIA), codificada pelo operon icaADBC, composto de quatro genes icaA, icaD, icaC, icaB. Essa matriz extracelular pode atuar protegendo os microrganismos de agentes antimicrobianos, o que torna necessária a remoção do corpo estranho para que seja alcançada a cura. Outro fator relevante envolvido na patogênese e considerado importante é a alta taxa de isolamento de Staphylococcus spp. resistente a meticilina, fazendo com que ocorra o uso em grande escala de antimicrobianos mais caros ou tóxicos como a Vancomicina. Os antibióticos ² - lactâmicos produzem um efeito bactericida pela inibição das PBPs na síntese dos peptideoglicanos. Quando o peptideoglicano não pode ser formado, ocorre um distúrbio do mecanismo de controle das hidrolases (autolisinas), assim a bactéria entra em ciclo lítico e este processo leva a morte celular. A resistência dos Staphylococcus spp. aos antibióticos ²-lactâmicos deve-se principalmente a dois mecanismos distintos, porém ambos podem interagir. O primeiro mecanismo é a produção da enzima ²-lactamase que hidrolisa o antibiótico, e o segundo esta associada à alteração do sitio de ação dos ² - lactâmicos pela produção de uma nova proteína ligadora de penicilina, a PBP2a, codificada pelo gene mecA, contido no elemento cromossômico móvel denominado SCCmec (Staphyloccocal chromossome cassete mec), amplamente distribuído entre os Staphylococcus. Muitos laboratórios não identificam as espécies de SCN, só as identificam em S. aureus e SCN pelos testes de catalase e coagulase, pois a identificação dos SCN consiste em uma série de testes bioquímicos, que necessitam de longo período de incubação tornando-o de pouca aplicabilidade prática nos laboratórios de microbiologia clínica de rotina. Mesmo com a automação da detecção de microrganismo no sangue, a identificação e a determinação da sensibilidade aos antimicrobianos ainda são demoradas, necessitando de métodos eficientes e mais rápidos, principalmente se tratando da urgência nos casos de bacteremia. A aplicação de técnicas de biologia molecular, entre elas a reação em cadeia da polimerase (PCR) para a identificação de bactérias se mostrou uma técnica promissora devido a sua rapidez, acurácia e sensibilidade na obtenção dos resultados. As técnicas de PCR sofreram melhorias e atualmente com a técnica de PCR multiplex consegue-se detectar múltiplos patógenos e mais de um gene para cada patógeno, utilizando-se múltiplos conjuntos de primers numa única reação. Assim, este trabalho objetiva avaliar a eficiência, acurácia e sensibilidade da técnica de PCR multiplex para a detecção de espécies de Staphylococcus spp. mais encontradas em hemoculturas, a presença do gene mecA de resistência a oxacilina e dos gene icaA, icaD, icaC responsáveis pela produção do biofilme nas amostras estudadas. (AU)