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Clonagem, expressão, purificação e caracterização estrutural da proteína triparedoxina peroxidase de Leishmania braziliensis

Processo: 11/10248-4
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de setembro de 2011
Vigência (Término): 31 de julho de 2012
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Mário Tyago Murakami
Beneficiário:Mariana Abrahão Bueno de Morais
Instituição-sede: Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovações (Brasil). Campinas , SP, Brasil
Assunto(s):Triparedoxina peroxidase   Leishmania braziliensis

Resumo

As leishmanioses são causadas por protozoários do gênero Leishmania, sendo transmitidas por insetos flebotomíneos. Esta doença afeta cerca de 350 milhões de pessoas em 88 países. De acordo com a Organização Mundial da Saúde, as leishmanioses constituem um problema de saúde pública, entretanto esforços para a descoberta de novos tratametos são insuficientes. A terapia atualmente utilizada apresenta elevada toxicidade, havendo também formas clínicas resistentes aos fármacos. Sendo a Leishmania um protozoário digênico, a existência mecanismos eficientes de evasão de moléculas tóxicas, como espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, é crucial para a capacidade de sobrevivência e replicação do parasita nas células do hospedeiro. A tryparedoxin peroxidase (TXNPx), um membro da família das peroxirredoxinas, é vital para a sobrevivência da Leishmania durante o estresse oxidativo gerado pelos macrófagos. Essa enzima antioxidante, que não está presente em mamíferos, participa de uma cascata enzimática para a detoxificação de hidroperóxidos descrita em Tripanosomatídeos e oferece novas opções para o desenvolvimento de agentes anti-Leishmania mais específicos. Encontrou-se, em Leishmania que superexpressava a TXNPx, um maior índice de crescimento, menor tempo de duplicação e uma maior resistência ao estresse oxidativo. Este trabalho tem como objetivo realizar a clonagem, expressão, purificação e estudos estruturais da tryparedoxin peroxidase de Leishmania braziliensis. Primeiramente, a sequência nucleotídica será amplificada e clonada para a expressão em sistema procarioto. A proteína será purificada por métodos cromatográficos e serão realizados ensaios de cristalização além de análises espectroscópicas e de homogeneidade estrutural através dos ensaios de Espalhamento Dinâmico de Luz (DLS) e Dicroísmo Circular. (AU)

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
MORAIS, MARIANA A. B.; GIUSEPPE, PRISCILA O.; SOUZA, TATIANA A. C. B.; ALEGRIA, THIAGO G. P.; OLIVEIRA, MARCOS A.; NETTO, LUIS E. S.; MURAKAMI, MARIO T.. How pH Modulates the Dimer-Decamer Interconversion of 2-Cys Peroxiredoxins from the Prx1 Subfamily. Journal of Biological Chemistry, v. 290, n. 13, p. 8582-8590, . (10/51730-0, 12/24134-3, 11/10248-4)
MORAIS, MARIANA A. B.; GIUSEPPE, PRISCILA O.; SOUZA, TATIANA A. C. B.; CASTRO, HELENA; HONORATO, RODRIGO V.; OLIVEIRA, PAULO S. L.; NETTO, LUIS E. S.; TOMAS, ANA M.; MURAKAMI, MARIO T.. Calcium and magnesium ions modulate the oligomeric state and function of mitochondrial 2-Cys peroxiredoxins in Leishmania parasites. Journal of Biological Chemistry, v. 292, n. 17, p. 7023-7039, . (11/10248-4, 10/51730-0, 12/24134-3, 15/05851-4)

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