Tecnologia microfluídica para estudo dos mecanismos de adesão de bactérias fitopatogênicas

Resumo

O fipatógeno Xylella fastidiosa (Xf), responsável por graves doenças em citros, videiras, cafeeiros e amendoeiras, entre outras plantas, apresenta, em sua superfície, diversas adesinas responsáveis pela colonização eficiente de insetos vetores e plantas hospedeiras. Trabalhos anteriores confirmaram a funcionalidade dessas proteínas, nos quais mutantes deficientes em adesinas tiveram sua capacidade de adesão reduzida. Recentemente, cepas com características fenotípicas distintas, incluindo diferenças quanto a capacidade de adesão célula a célula e ao substrato, tiveram sua sequência genômica determinada em nosso laboratório. Análises preliminares indicaram diferenças quanto à presença de adesinas, fato que motivou este projeto. Para melhor caracterizar a capacidade de adesão e motilidade dessas cepas, propomos o uso de microscopia acoplada a câmaras de microfluídica, permitindo a observação de células vivas sob condições de fluxo. Uma outra frente de investigação que iniciaremos é a caracterização bioquímica das proteínas de adesão de Xf, iniciando por MrkD. Através da produção de proteína recombinante pretendemos gerar material para iniciarmos estudos estruturais e funcionais, incluindo anticorpos policlonais que serão usados em ensaios de inibição da adesão celular em câmaras de microfluídica. Dependendo do sucesso desse objetivo outras proteínas de adesão também serão exploradas. Como um último objetivo, faremos tentativas de cultivar in vitro o patógeno Candidatus Liberibacter asiaticus, agente causador do Greening, doença devastadora nos pomares citrícolas paulistas. O avanço na compreensão deste patógeno tem sido dificultado pela incapacidade de manutenção de culturas em laboratório, um impedimento que será possivelmente eliminado pelas condições de fluxo contínuo, nas quais novos nutrientes são constantemente fornecidos e metabólitos tóxicos eliminados. (AU)