Amplificação heteróloga e otimização de loci de microssatélites nucleares em espécies de Bromeliaceae.

Resumo

Apesar das análises de regiões de microssatélites terem se tornado uma ferramenta muito útil para uma grande variedade de estudos de variabilidade genética em populações, sua caracterização em novas espécies é ainda um processo caro e trabalhoso. Além disso, os microssatélites nucleares são considerados espécie-específicos, pois os primers que flanqueiam as ilhas de microssatélites exigem alto grau de homologia com as seqüências de DNA para que possam proporcionar a amplificação corretamente. Recentes evidências sugerem que muitos marcadores de microssatélites podem funcionar em espécies proximamente relacionadas. A distribuição das taxas de amplificação heteróloga (amplificação entre espécies) de microssatélites nucleares varia muito entre táxons, sendo maior em animais e altamente variável em angiospermas. O potencial de sucesso de transferência parece ser maior em espécies com tempo de geração longo, sistemas de cruzamento misto ou alógamo e onde o tamanho do genoma das espécies alvo é menor do que o da espécie para a qual os loci foram desenvolvidos. A capacidade de transferir e aplicar o mesmo conjunto de loci de microssatélites em diferentes espécies pode facilitar significativamente os estudos: entre espécies proximamente relacionadas e de espécies endêmicas. Isto se torna importante especialmente onde os recursos alocados para estudos de genética da conservação são limitados, uma vez que a transferência heteróloga diminui o custo efetivo do desenvolvimento de loci de microssatélites. Somente há pouco tempo, marcadores do tipo microssatélites começaram a ser utilizados para estudos de genética de populações em Bromeliaceae. Atualmente cerca de 35 loci de microssatélites nucleares foram isolados e caracterizados em espécies de Bromélias (Pitcairnia: Sarthou et al, 2003 e Paggi et al 2008); Tillandsia e Guzmania; Vriesea e Alcantarea . Os trabalhos realizados com espécies de bromélias mostram que existe um grande sucesso na amplificação heteróloga de loci de microssatélites nucleares mesmo entre espécies pertencentes a diferentes subfamílias.Objetivos1)Auxiliar nas coletas de campo e extração de DNA das amostras dos três sub-projetos;2)Otimizar os protocolos de extração de DNA para diferentes espécies de bromélias;3)Otimizar os protocolos de amplificação para loci de microssatélites nucleares desenvolvidos para outras espécies de bromélias;4)Preparar os tampões necessários para todas as etapas dos procedimentos de extração DNA e eletroforese em gel de agarose.5)Auxiliar na aquisição e implementação de matérias permanentes e de consumo.