Estudo do mecanismo de regulação da expressão gênica pelo regulador Fur em Klebsiella pneumoniae: implicações na expressão de fatores de virulência mediada por quorum-sensing.

Resumo

Klebsiella pneumoniae é uma bactéria gram-negativa que, sendo um patógeno oportunista, causa uma variedade de infecções em pacientes imunologicamente deprimidos, tais como pneumonia, meningite e septicemia. O projeto ao qual se vincula esta bolsa TT-3 tem por objetivo a identificação e caracterização de genes associados à virulência em K. pneumoniae cuja expressão é controlada por ferro por intermédio do regulador transcricional Fur. Uma das etapas do projeto é a caracterização, por PCR em tempo real, do padrão de expressão dos genes potencialmente regulados por Fur. Uma etapa crítica nesta técnica é a normalização das amostras investigadas por meio de um gene endógeno, ou controle interno. Um gene endógeno adequado deve, preferencialmente, apresentar um padrão de expressão constitutivo; isto é, com poucas variações, independe das condições de cultivo da bactéria. Ao contrário de outras bactérias patogênicas, para K. pneumoniae não há relatos na literatura de trabalhos descrevendo a identificação de genes endógenos adequados. O gene endógeno atualmente utilizado em K. pneumoniae é o gene rrsH, que codifica RNA ribossômico 16S. No entanto, há sérias restrições quanto à utilização de um RNA ribossômico para a normalização do RNA mensageiro dos genes alvos.