Análise de sequências de DNA repetitivas de Engystomops amazônicos

Resumo

As interessantes variações cromossômicas já descritas para o gênero Engystomops fazem desse grupo monofilético um interessante modelo para estudos de evolução cromossômica. Já que sequências de DNA repetitivas estão frequentemente envolvidas em rearranjos cromossômicos (exemplos em Bulazel et al., 2007) e tendo em vista a presença de grandes blocos de heterocromatina nos diferentes cariótipos de Engystomops amazônicos já estudados (Targueta et al., 2010), a análise de sequências de DNA repetitivo encontradas nessas regiões cromossômicas desperta especial interesse. Dentre as regiões heterocromáticas citadas, encontram-se grandes segmentos dos diferentes morfos de cromossomos X encontrados em distintas populações de Engystomops amazônicos.O objetivo deste sub-projeto é auxiliar justamente na identificação e na análise de sequências repetitivas de E. petersi e de E. freibergi, com o intuito de contribuir para o estudo da evolução cromossômica nesse grupo, com especial ênfase a aspectos relativos à diferenciação dos cromossomos sexuais. Para tanto, amostras do DNA genômico dessas espécies serão clivadas com enzimas de restrição e os fragmentos gerados serão analisados em busca de sequências repetitivas. Adicionalmente, os cromossomos sexuais X e Y desses anuros serão microdissecados, amplificados por DOP-PCR e utilizados como sondas em ensaios de hibridação in situ. O envolvimento da bolsista TT-3 nesse sub-projeto deverá permitir necessário avanço nessas análises, que representam uma etapa importante do projeto que conta com algumas técnicas ainda não padronizadas em nosso laboratório.