Genótipos da Haptoglobina nas Doenças Falciformes

Resumo

Para dar suporte ao projeto de pesquisa e capacitar-se em técnicas hematólógicas, de análises protéicas e moleculares, o estagiário deverá cumprir um programa que envolverá as seguintes atividades: - preparo de soluções e tampões- determinação dos parâmetros hematológicos (no. de hemácias, de leucócitos e de plaquetas, hematócrito e hemoglobina, contagem leucocitária diferencial, índices hematimétricos e plaquetários) em contadores eletrônicos- confecção, manual e automatizada, e observação morfológica, por microscopia direta, de esfregaços sangüíneos- preparo e contagem, manual e automatizada, de reticulócitos- preparo de hemolisados livres de estroma- eletroforese de hemoglobinas em pH alcalino (acetato de celulose)- eletroforese de hemoglobinas em pH ácido (gel de ágar)- quantificação da Hb A2 por eluição da banda correspondente após eletroforese em acetato de celulose- quantificação da Hb Fetal por desnaturação alcalina- análise qualitativa e quantitativa de hemoglobinas por cromatografia líquida de alta performance (HPLC) de troca catiônica- análise de cadeias globínicas por HPLC em fase reversa (RP-HPLC)- teste de solubilidade das hemoglobinas- determinação dos níveis plasmáticos de haptoglobina por nefelometria- Extração de DNA dos leucócitos do sangue periférico- Amplificação seletiva de genes de interesse por PCR- PCR alelo-específica para genotipagem da haptoglobina- Análises de Restrição