Avaliação de interações heterotípicas de neutrófilos em condições inflamatórias

Resumo

A resposta inflamatória constitui um processo de defesa primária do organismo contra vários estímulos extracelulares, como por exemplo, vírus, patógenos, alimentos ou poluidores ambientais. Um passo fundamental neste processo é o recrutamento de leucócitos para os sítios inflamatórios e isto envolve o rolamento destas células, adesão firme ao endotélio e migração transendotelial. Evidências recentes sugerem que durante a etapa inicial de rolamento ao longo da parede endotelial vascular, neutrófilos já integrem sinais para eventos subsequentes, tais como adesão às células endoteliais e ativação. Além disso, quando o neutrófilo adere às células endoteliais, ele fica em uma posição estratégica que permite que ele integre sinais entre as células endoteliais ativadas e as células circulantes sanguíneas, o que exerceria eventos fisiopatológicos ainda dentro do lúmen vascular que poderiam alterar significativamente o fluxo sanguíneo. As bases moleculares destas interações ainda não têm sido elucidadas e investigações na dinâmica neutrófilo-plaqueta e neutrófilo-hemácia em doenças inflamatórias são áreas de investigação potencialmente atrativas. Diante disso, entender as vias envolvidas intrinsecamente na adesão de neutrófilos às células endoteliais e as interações com outros tipos celulares, por um ensaio de adesão que mimetize situações de fluxo nos vasos sanguíneos humanos (plataforma de microfluídos VenaFlux"), pode ajudar no desenvolvimento de novos alvos terapêuticos anti-inflamatórios e beneficiar algumas condições que apresentam quadro inflamatório vascular crônico, como por exemplo, a anemia falciforme. A proposta deste trabalho é avaliar as interações heterotípicas de neutrófilos com hemácias e neutrófilos com plaquetas sob condições inflamatórias, investigando as moléculas de adesão e as vias de sinalização intracelular envolvidas nestas interações, através do ensaio de adesão celular em fluxo in vitro. Serão avaliadas células obtidas de sangue de indivíduos adultos saudáveis (neutrófilos, hemácias e plaquetas) e realizados os ensaios de adesão em fluxo a células endoteliais humanas provenientes de cultura celular. A investigação das vias moleculares envolvidas será feita através da observação das interações heterotípicas de neutrófilos em fluxo após bloqueio de determinadas moléculas por anticorpos monoclonais ou inibidores. Estes experimentos também serão aplicados a um modelo de doença inflamatória vascular, avaliando estas interações heterocelulares em células provenientes de indivíduos com anemia falciforme. Através deste estudo, espera-se identificar possíveis alvos terapêuticos para intervenções anti-inflamatórias e melhorar o entendimento de condições caracterizadas por inflamação vascular, como anemia falciforme, aterosclerose, acidente vascular cerebral (AVC) e lesão pulmonar aguda associada à transfusão (TRALI), entre outras condições.