FORMAÇÃO DE BIOFILMES, PATOGENICIDADE E QUORUM-SENSING EM CEPAS DE E. faecium E E. faecalis ISOLADAS NO PROCESSAMENTO DE RICOTA.

Resumo

A recente ligação dos enterococos com o ser humano está relacionada à sua entrada na cadeia alimentar através da utilização como culturas starter, probióticos e produção de bacteriocinas, bem como seu habitat entérico, resistência a antimicrobianos tanto de uso clínico como veterinário, e seu envolvimento em infecções hospitalares. Além disso, os Enterococcus são capazes de formar biofilmes em superfícies utilizadas no processamento de alimentos e de utilizarem a via de sinalização Quorum sensing para regular alguns processos, como a expressão dos fatores de virulência. Com base nisso, o objetivo do trabalho é pesquisar a adesão e a formação de biofilmes, a patogenicidade e a produção de moléculas sinalizadoras de quorum sensing por cepas de E. faecium e E. faecalis isoladas da linha de processamento de ricota. Serão estudadas 121 cepas de Enterococcus, sendo 96 cepas de E. faecium e 25 cepas de E. faecalis, isolados estes provenientes de amostras de matéria-prima, ricota e ambiente obtidas de uma linha de processamento de ricota. Através da técnica de RFLP será caracterizado o perfil das cepas de E. faecium e E. faecalis. A avaliação do potencial de patogenicidade destas duas espécies será realizada através da atividade de hemolisina, produção de gelatinase e atividade termonuclease. O genes de virulência van A, as, gelE, cylM, cylB, cylA, esp, efaA, ace serão avaliados através da técnica de PCR. Será testada a resistência a dez antimicrobianos através do teste de sensibilidade por disco-difusão. A formação e adesão de biofilmes em cupons de aço inoxidável serão avaliadas nas cepas de Enterococcus que apresentarem características de resistência e patogenicidade mais marcantes, na temperatura de 25ºC por 2, 4, 8, 16, 24 e 48 horas. A partir disso, será avaliada a resistência deste biofilme formado a quatro diferentes sanitizantes utilizados na indústria de laticínios e ainda a interação das cepas de E. faecium ou E. faecalis com Listeria monocytogenes na formação de biofilmes. A produção de moléculas sinalizadoras de quorum sensing pelas cepas de E. faecium e E. faecalis e a possível participação no desenvolvimento de biofilmes será pesquisada através do teste biológico utilizando o biossensor Vibrio harveyi e da técnica de PCR para a detecção do gene lux S.