Análise do transcriptoma do desenvolvimento embrionário de fêmeas de Apis mellifera

Resumo

Os mecanismos que controlam a expressão dos genes operam em muitos níveis e podem ocorrer antes da transcrição, após a transcrição e após a tradução. Em 1993, foi descoberta uma nova classe de moléculas reguladoras que atuam após a transcrição gênica: os RNAs não-codificadores. Os microRNAs (miRNAs) são moléculas de RNA não-codificador que após processado têm de 20-23 nucleotídeos. A molécula de miRNA madura se une ao complexo proteico RISC e dirige a regulação negativa da expressão dos mRNAs-alvo. Em Drosophila melanogaster sabe-se que os miRNAs participam de processos regulados no desenvolvimento e interferem em importantes processos biológicos como apoptose, divisão celular e oogênese. Abordagens computacionais têm sido desenvolvidas para identificar os mRNAs-alvo dos miRNAs e assim fornecer pistas sobre a função do miRNA baseando-se no papel descrito para os alvos. Muitos organismos já tiveram seu transcriptoma sequenciado, entre eles D. melanogaster e Bombyx mori. Para as abelhas A. mellifera, foi feita uma análise computacional que identificou 65 candidatos a miRNAs. No entanto, nenhum estudo em larga escala do transcriptoma foi feito para as abelhas A. mellifera. O principal objetivo desse projeto é sequenciar o transcriptoma do desenvolvimento embrionário de fêmeas de A. mellifera usando o sistema AB SOLiD (Applied Biosystems, Life Technologies). O sequenciamento de RNAs em larga escala extraídos em diferentes estágios do desenvolvimento é uma ferramenta poderosa não apenas para medir as mudanças no perfil dos transcritos, mas também para descobrir miRNAs específicos da espécie. A validação das análises computacionais será feita por PCR em tempo real dos genes (miRNAs e mRNAs-alvo) da cascata de determinação do sexo no desenvolvimento embrionário de fêmeas e machos de A. mellifera. O conhecimento das interações gênicas que modulam a embriogênese de A. mellifera permitirá a proposta de um modelo genético de desenvolvimento, através da análise das categorias funcionais dos principais genes. (AU)