Validação da PCR multiplex na detecção e identificação de Candida spp. em infecções de corrente sanguínea de pacientes pediátricos gravemente doentes

Resumo

As infecções sistêmicas causadas por Candida spp. representam importante causa de morbidade e mortalidade em pacientes pediátricos internados em unidades de cuidados intensivos. O aumento na freqüência destas infecções se deve a fatores como tratamentos prolongados com antimicrobianos de amplo espectro, uso de nutrição parenteral e emulsões lipídicas, ventilação mecânica prolongada, presença de cateteres venosos centrais, quimioterapia, e maior sobrevida de pacientes com doença de base grave. Os métodos convencionais de cultivo apresentam sensibilidade limitada, além de demandar tempo prolongado para a identificação das espécies infectantes. A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) requer pequenos volumes de sangue para análise, situação ideal para crianças gravemente enfermas, propiciando diagnóstico rápido e identificação precisa das espécies de Candida. Este estudo tem como objetivo validar a técnica de PCR do tipo multiplex, para identificar sete espécies de Candida em amostras de sangue de pacientes pediátricos com risco de desenvolver candidemias, e verificar o grau de concordância dos resultados com as hemoculturas. Serão analisadas amostras sanguíneas de 30 pacientes recém-nascidos e de 30 pacientes com idade variando de 30 dias até 20 anos incompletos, internados em unidades de cuidados intensivos do Instituto da Criança - HCFMUSP, que apresentarem condições clínicas que elevam o risco de desenvolver candidemia. Como grupo controle, serão incluídas no estudo 30 crianças sem doenças infecciosas, internadas na unidade hospitalar para cirurgias de pequeno porte. Serão determinados os limiares de detecção e especificidade do sistema de amplificação com primers espécie-específicos a serem delineados para o estudo. As amostras de DNA extraídas do sangue dos pacientes serão submetidas às amplificações do tipo multiplex e os produtos amplificados serão analisados por eletroforese em géis de agarose. Nos casos em que os resultados sejam positivos somente pela técnica de PCR multiplex (com hemoculturas negativas), os produtos amplificados serão submetidos ao sequenciamento automatizado. A concordância entre os resultados obtidos pela PCR e pelas hemoculturas será avaliada pelo teste de McNemar, adotando-se nível de significância de 5%. (AU)