Investigação da função da Arginina Metiltransferase LmjPRMT7 no controle da expressão gênica em Leishmania major

Resumo

Parasitos protozoários do gênero Leishmania representam alvo de grande interesse e intenso estudo em Biologia Molecular. Apesar disso, a compreensão acerca da biologia desses microrganismos é ainda muito deficiente. Como a regulação da expressão gênica em Leishmania spp. ocorre predominantemente em nível pós-transcricional, é possível que diferentes classes de proteínas ligantes de RNA atuem nas vias de regulação de expressão gênica nesse parasito. Recentemente, estudos em mamíferos e leveduras demonstraram funções importantes das Arginina N-metiltransferases (PRMTs) nesse contexto, e grande parte de seus substratos são proteínas associadas a RNAs. As investigações e conceitos estabelecidos acerca das PRMTs e seu papel no metabolismo de RNA em outros organismos tornam promissor o estudo dessas enzimas em Leishmania, já que a modificação pós-traducional catalisada pelas PRMTs pode ocorrer em proteínas-chave no controle da estabilidade e processamento de transcritos. Desse modo, propomos a investigação da função da proteína LmjPRMT7 em L. major, predita como homóloga de PRMT7 de Trypanosoma brucei. Para definir a função da LmjPRMT7 putativa e os processos sobre os quais atua, geraremos transfectantes de L. major superexpressores e nocaute desse gene. Uma investigação dos padrões de expressão gênica global nos transfectantes será realizada por meio de análise transcriptômica e proteômica. Ensaios bioquímicos serão empregados para confirmar a atividade de metiltransferase da proteína em estudo. Para demonstrar sua associação direta com outras proteínas serão realizados experimentos de imunoprecipitação e ensaios de mobilidade eletroforética em gel. (AU)