MICRORGANISMOS OPORTUNISTAS EM LESÕES DE ESTOMATITE PROTÉTICA E INFLUÊNCIA DA TERAPIA FOTODINÂMICA NOS FATORES DE VIRULÊNCIA DE Candida spp.

Resumo

Os objetivos deste estudo serão isolar e identificar micro-organismos oportunistas presentes em lesões de estomatite protética (EP); verificar a produção de fatores de virulência por Candida albicans, Candida dubliniensis, Candida glabrata e Candida tropicalis; avaliar os efeitos da terapia fotodinâmica (TFD) em culturas planctônicas e biofilmes formados por estas leveduras. Também será avaliada a ação da TFD nos fatores de virulência expressos por tais leveduras. Serão estudados 50 pacientes com EP e 50 indivíduos sem tais lesões. A coleta de material da cavidade bucal ocorrerá com auxílio de swabs estéreis e através de enxagues bucais. As amostras serão semeadas em ágar seletivos e os micro-organismos identificados bioquimicamente pelo sistema API®. Para C. dubliniensis esta identificação também será realizada através da técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Isolados identificados como C. albicans, C. dubliniensis, C. glabrata e C. tropicalis serão avaliadas quanto à produção dos seguintes fatores de virulência: secreção das enzimas fosfolipase, proteinase, condroitinase, lipase, hemolisina; hidrofobicidade celular; produção de tubo germinativo; e, formação de biofilme. Os ensaios de TFD serão realizados em culturas planctônicas, e os biofilmes formados no sistema Calgary Biofilm Device (CBD), com as cepas de C. albicans, C. glabrata e C. tropicalis e os isolados de C. dubliniensis que tiverem maior e menor expressão dos fatores de virulência. Como fonte de luz será utilizado o Diodo Emissor de Luz (LED) verde (532±10 nm) com potência de 80 mW e fotossensibilizador eritrosina. Os números de unidades formadoras de colônias por mililitro (UFC/mL) em Log10 serão analisados estatisticamente (p< 0.05). Também será realizada microscopia eletrônica de varredura e microscopia confocal de varredura a laser nos discos com biofilmes dos grupos controle e TFD. Após a realização dos ensaios de TFD em culturas planctônicas e biofilmes de C. albicans, C. dubliniensis, C. glabrata e C. tropicalis, serão avaliados novamente a expressão fenotípica dos fatores de virulência nas leveduras remanescentes.