Avaliação da imunogenicidade de proteínas recombinantes baseadas em antígenos de diferentes estágios do Plasmodium vivax expressos em Pichia pastoris

Resumo

A malária é um grave problema de saúde pública mundial que é reconhecidamente uma prioridade da pesquisa e desenvolvimento de vacinas. Esta doença infecciosa é causada pelo parasito Plasmodium spp, cuja espécie de maior distribuição geográfica mundial e maior prevalência nas Américas é o P. vivax. Até o momento, não existe uma vacina eficaz contra a infecção malárica, apesar dos intensos esforços de pesquisa na área. A complexidade do ciclo de vida e a intensa diversidade antigênica do parasito inferem que seja pouco provável que uma formulação vacinal eficaz limite-se a utilizar um único antígeno. Neste contexto, a combinação de regiões imunodominantes de antígenos de diferentes estágios do ciclo de vida do parasito, em uma única formulação vacinal, possui melhor prognóstico na indução de resposta imune protetora. As estratégias multiestágio-multiantígeno visam à melhoria da atividade antiparasitária e a significativa redução da seleção de parasitos resistentes a ação imune humana. Desta forma, propomo-nos a avaliar a imunogenicidade induzida, em modelo murino, de uma formulação composta por antígenos dos estágios pré-eritrocítico e eritrocítico assexuado do ciclo de vida do parasito, PvCS-All e PvAMA-1, obtidos pelo sistema de expressão em levedura Pichia pastoris. CS-All é uma construção quimérica inédita da Proteína Circumsporozoíta (CS) que fusiona epítopos mapeados nos repeats da região central das três cepas variantes de P. vivax, VK210, VK247 e P. vivax like, permitindo a cobertura da variabilidade alélica do antígeno majoritário do estágio pré-eritrocítico. É nossa hipótese de trabalho que CS-All seja capaz de induzir uma significativa resposta imune e que esta possa ser potencializada pela combinação ao Antígeno 1 de Membrana Apical (AMA-1), o qual já foi previamente caracterizado por nosso grupo. As imunizações experimentais serão realizadas, em um mesmo protocolo de vacinação experimental, com as duas proteínas recombinantes inoculadas individualmente e em combinação. Serão avaliadas a especificidade dos anticorpos induzidos pelos diferentes antígenos e a resposta celular induzida, pela proliferação de células T e produção de citocinas contra a proteína recombinante PvAMA-1 e os epítopos que compõem a proteína PvCS-All. Anticorpos gerados pelas imunizações serão também utilizados para verificar, através de imunofluorescência indireta, o reconhecimento da proteína nativa por soros de camundongos imunizados. (AU)