Busca por alvos de regulação pelo segundo mensageiro c-diGMP em Pseudomonas aeruginosa

Resumo

Pseudomonas aeruginosa é uma proteobactéria do grupo gama, que atua como um patógeno oportunista, causando infecções em pacientes imunocomprometidos e sendo o maior causador de infecções crônicas em pacientes portadores de fibrose cística. O segundo mensageiro bis-(3',5')-di-guanosina monofosfato cíclico (c-di-GMP) está relacionado com a patogenicidade e a adaptação de diversas bactérias, coordenando a expressão de genes envolvidos com virulência, motilidade e formação de biofilme. Várias proteínas apresentam o domínio GGDEF, com função de diguanilato ciclase, enquanto proteínas com domínios EAL ou HD-GYP agem como fosfodiesterases de c-di-GMP. O genoma de P. aeruginosa PA14 apresenta vários genes que codificam proteínas envolvidas no metabolismo de c-di-GMP, o que pode indicar um amplo papel regulatório deste nucleotídeo. Este trabalho pretende buscar vias reguladas por c-di-GMP, utilizando uma estratégia genética. Serão construídas linhagens em que os níveis de c-di-GMP possam ser controlados pela superexpressão da fosfodiesterase PvrR ou da diguanilato ciclase PA14_72420, cujos genes estarão sob o controle de um promotor indutível por arabinose. Estas linhagens serão receptoras de uma biblioteca de fusão de tradução, em que a expressão do gene repórter lacZ estará sob o controle de fragmentos aleatórios do cromossomo de PA14. Os clones que apresentarem atividade de ²-galactosidase dependente da concentração intracelular de c-di-GMP serão analisados. Após a identificação dos clones, este trabalho seguirá por duas linhas paralelas: a primeira buscará sequências e/ou estruturas conservadas nas regiões regulatórias, e a segunda irá caracterizar a função de novos genes regulados por c-di-GMP. O estudo de um mecanismo regulatório específico de bactérias poderá trazer não só uma maior compreensão da fisiologia destes organismos, mas também identificar prováveis alvos para o desenvolvimento de novas drogas anti-infectivas.