Transformação genética de Citrus sinensis (L.) Osbeck para resistência a Candidatus Liberibacter ssp

Resumo

A citricultura brasileira tem sido afetada por diversos problemas fitossanitários que interferem em sua produtividade. A doença Huanglongbing (HLB), causada pela bactéria Candidatus Liberibacter ssp., que coloniza os vasos do floema tem provocado grandes prejuízos à cultura. Uma importante alternativa para o controle desta doença consiste na obtenção de variedades resistentes, por meio da transformação genética, sendo que uma das estratégias para a obtenção de plantas transgênicas resistentes a doenças causadas por bactérias baseia-se na introdução de genes que codificam peptídeos antibacterianos. O objetivo deste projeto de pesquisa será obter plantas transgênicas de laranja doce 'Hamlin', 'Natal', 'Pêra' e 'Valência', com o gene que codifica o peptídeo antibacteriano atacina A (attA), controlado pelos promotores, AtSUT2 e CsPP2, visando a expressão gênica específica nos vasos do floema. A transformação genética será realizada via Agrobacterium tumefaciens contendo o plasmídeo pCAMBIA 2201 com o cassete de expressão. Para os experimentos de transformação genética será utilizado como explante, segmentos de epicótilo obtidos de plântulas cultivadas in vitro. A confirmação da transformação genética será realizada pela análise de PCR. As plântulas identificadas como transgênicas por PCR serão aclimatizadas e posteriormente transferidas para a casa-de-vegetação específica para o cultivo de plantas transgênicas. Análises de Southern blot e Northern blot serão realizadas nas plantas PCR positivas aclimatizadas, para confirmação da integração e transcrição do transgene. As linhagens de plantas transgênicas regeneradas serão avaliadas para a resistência a Candidatus Liberibacter asiaticus.