Efeito de diferentes técnicas de ventilação mecânica sobre o estresse oxidativo pulmonar induzido por modelo de síndrome do desconforto respiratório agudo em coelhos

Resumo

Introdução: A Síndrome do Desconforto Respiratório Agudo (SDRA) caracteriza-se por processo inflamatório que leva à quebra da barreira alvéolo-capilar com desenvolvimento de edema intersticial e alveolar, diminuição da complacência pulmonar, hipertensão pulmonar, desequilíbrio da relação ventilação/perfusão e hipoxemia refratária à administração de oxigênio. Apesar do progresso no entendimento de sua fisiopatologia e conseqüente avanço em estratégias terapêuticas de pacientes com SDRA, a mortalidade permanece elevada, variando de 40% a 60%. Embora seja desconhecido o exato mecanismo que leva a SDRA, várias evidências sugerem que pacientes portadores da síndrome estão expostos a elevado grau de estresse oxidativo (EO) induzido por uma variedade de eventos. O estresse oxidativo é um evento resultante do desequilíbrio entre o sistema de defesa antioxidante e a geração de espécies reativas do oxigênio (ROS) ou do nitrogênio (RNS), que leva ao acúmulo de lesão oxidativa em biomoléculas. Apesar do uso de antioxidantes ter mostrado algum benefício na evolução da SDRA, não há evidência clínica para o uso rotineiro dessa estratégia. Por outro lado, a ventilação pulmonar mecânica (VM) constitui um dos principais pilares do tratamento da SDRA, sendo capaz de modificar a evolução da doença e reduzir a mortalidade. Existem dois métodos ventilatórios de proteção pulmonar utilizados na SDRA. Um é baseado na VM convencional (VMC) e outro na ventilação oscilatória de alta frequência (VAF). Objetivo: Investigar o estresse oxidativo pulmonar por meio da capacidade antioxidante total (TAP) em modelo experimental de SDRA induzida em coelhos, ventilados com VM convencional protetora e VAF. Material e Métodos: O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Experimental da instituição e será realizado no Laboratório Experimental do Centro de Pesquisa Clínica e Experimental do Departamento de Pediatria da Faculdade de Medicina de Botucatu-UNESP (Protocolo n° 600). Obtenção, Preparo e Aleatorização dos Animais: Trata-se de estudo prospectivo, controlado, in vivo e em animais de laboratório. Serão utilizados coelhos jovens brancos fornecidos pelo Biotério da UNESP-Campus de Botucatu, com peso corporal variando de 2,0 a 3,0 Kg. Formação dos grupos experimentais: Os animais serão escolhidos ao acaso para compor um dos três grupos experimentais, cada um deles com 10 animais: * Animais sadios instrumentados submetidos à VM (controle - GC; n=10); * Animais com SDRA submetidos à VM protetora (GVM; n=10); * Animais com SDRA submetidos à VAF (GVAF; n=10); Determinação da Lesão Oxidativa Pulmonar: O estresse oxidativo será avaliado pelo método da Capacidade Antioxidante Total (TAP) descrito por Aldini et al. (2001). O método é baseado na oxidação de análogo lipofílico (probe) denominado BODIPY [ác.4,4-difluoro-5-(4-fenil-1,3-butadienil)-4-bora-3a,4a-diaza-s-indaceno-3-ndecanóico] e por meio de um gerador de radical lipoperoxil (LOO*) de compartimento lipofílico denominado MeO-AMVN [2,2¢-azobis(4-methoxi-2,4-dimetil-valero-nitrilo)]. A oxidação do BODIPY origina um produto de fluorescência verde que pode ser detectado em Contador de Emissão de Luz Fluorescente. O ácido (BODIPY 581/591) será fornecido pela Molecular Probes (Eugene, OR, USA) e MeO-AMVN, obtido da Wako Chemicals (Richmond, VA, USA). Análise Estatística: Variáveis com distribuição normal serão comparadas entre os diversos grupos experimentais por meio de análise de variância (ANOVA), com subseqüentes comparações múltiplas entre pares por meio do teste de Student-Newman-Keuls. Variáveis de distribuição não-normal serão comparadas entre os diversos grupos por meio de ANOVA de Kruskal-Wallis, com subsequentes comparações pelo teste de Dunn. A análise do comportamento de uma variável ao longo do tempo será analisada pela análise de medidas repetidas de Friedman, com comparações posteriores pelo método de Dunnett. Será utilizado nível de significância de 5%. (AU)