Investigação de mecanismos e elementos envolvidos no processo de regulação de expressão gênica em Leishmania

Resumo

Protozoários do gênero Leishmania são agentes etiológicos das leishmanioses, doença endêmica em 88 países. Eucariotos ancestrais considerados importantes organismos-modelo por exibirem características biológicas incomuns como trans-splicing, transcrição policistrônica, e regulação da expressão gênica predominantemente pós-transcricional. De fato, os dados disponíveis indicam que os genes sejam transcritos e processados continuamente e que sua expressão seja regulada pelo transporte seletivo para o citoplasma, pela estabilidade do mRNA ou iniciação de tradução. A maior parte dos estudos concentra-se em demonstrar o papel de regiões 3' não traduzidas (3'-UTR), que associadas a proteínas, modulam a expressão gênica participando da seleção das seqüências de RNA mensageiro a serem traduzidas. A exploração dos dados dos genomas de algumas espécies de tripanosomatídeos nos permite racionalizar as abordagens de estudo da biologia dos tripanossomatídeos. Em nosso laboratório, Elton J.R Vasconcelos desenvolveu algoritmos que extraíram do genoma de L. braziliensis, L. infantum e L. major, a partir das coordenadas das CDSs definidas na anotação dos genomas, as regiões flanqueadoras inter-codificadoras conservadas nos três genomas, Leish_ciceDB. Nosso objetivo com esse estudo é caracterizar alguns dos elementos identificados visando compreender vias de regulação da expressão gênica no parasito. Teremos como foco de nossa investigação genes envolvidos no fluxo da informação genética e utilizaremos o Leish_ciceDB para identificar os elementos a serem utilizados em estudos funcionais. A interação dos elementos conservados com proteínas, será avaliada por ensaios de retardo de migração eletroforética em gel (EMSA). O papel do complexo formado pelos elementos conservados e polipeptídeos identificados será investigado por manipulação genética do parasito. Os estudos funcionais in vivo incluirão a avaliação dos níveis de expressão e a localização de genes repórteres na presença ou ausência do elemento conservado, e a importância de sua interação com os polipeptídeos identificados no controle da expressão em Leishmania.