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Avaliação da atividade biológica e imunogenicidade da molécula rFVIIIdBSQGMFG recombinante em camundongos hemofílicos

Processo: 08/02311-5
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de setembro de 2008
Vigência (Término): 31 de julho de 2010
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
Pesquisador responsável:Aparecida Maria Fontes
Beneficiário:Nathália Gonsales da Rosa Garzon
Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Hemofilia A   Imunogenicidade
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:Camundongos hemofílicos A | Fator VIII recombinante | Hemofilia A | Imunogenicidade | Hemofilia A

Resumo

A hemofilia A é uma desordem sanguínea oriunda da produção deficiente de moléculas de fator VIII (FVIII) biologicamente ativas. O tratamento com FVIII recombinante (FVIIIr) oferece vantagens em relação ao FVIII derivado do plasma (FVIIIdp), tais como: a pureza, segurança quanto a contaminação viral e a disponibilidade ilimitada. Neste contexto, o laboratório de transferência gênica do Hemocentro de Ribeirão Preto desenvolve o projeto sobre produção do FVIII de coagulação sanguínea humana em células de mamífero há 11 anos. De um conjunto de 37 linhagens transgênicas duas se mostraram mais promissoras em termos do nível de FVIII biologicamente ativo em ensaios in vitro. Dando continuidade a esse projeto, o presente estudo apresenta dois objetivos principais: 1) avaliar em modelo animal hemofílico a eficácia da molécula recombinante denominada rFVIIIdBSQGMFG e 2) avaliar a imunogenicidade desta proteína recombinante produzida pela linhagem celular recombinante HepG2/rFVIII-P140K. Para tanto, serão gerados sobrenadantes dessa linhagem celular e os mesmos submetidos a protocolos de concentração e dosagem da atividade biológica in vitro do FVIII recombinante. Por fim, os sobrenadantes já concentrados serão infundidos em camundongos portadores de hemofilia A e em diferentes tempos após a infusão o sangue dos animais será coletado e submetido à análise da atividade biológica do FVIII pelos testes da tromboplastina parcial ativada (TTPa) e da ativação do FX (ensaio cromogênico). Também será avaliada a presença ou não de anticorpos inibitórios relativos ao rFVIII pelo ensaio de Bethesda.

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