Interação entre vias de reparo de DNA e sinalização em resposta a danos através de silenciamento gênico

Resumo

A luz ultravioleta (UV) e alguns agentes químicos promovem grandes distorções na estrutura do DNA, o que compromete mecanismos vitais para a célula. Em resposta, células ativam uma sinalização em resposta a danos no DNA que coordenam a progressão do ciclo celular, vias de reparo de DNA e indução de morte celular. Como estratégia, as células podem remover as lesões, através de vias de reparo de DNA, ou tolerá-las, através de polimerases específicas que transpõem as lesões. Quinases transduzem os sinais que coordenam a resposta celular a esse tipo de agravo. Porém, como estas quinases interagem com as vias de reparo e de tolerância a danos no DNA ainda não são totalmente conhecidas. Neste projeto, estudaremos a interação entre a sinalização em resposta a danos no DNA, mediado pelas quinases ATR e DNA-PK, com a via de reparo de DNA NER e o mecanismo de tolerância a lesões mediado pela polimerase N, através da busca de possíveis efeitos sinergísticos em resposta a agentes UVB e o quimioterápico cisplatina. Para isso, geraremos células com duplas-deficiências nos produtos dos genes XPV, XPC, ATR e DNA-PK, através de interferência por RNA. Com essas células, investigaremos o efeito da depleção dessas proteínas na sensibilidade das células através da quantificação de lesões no DNA, da sobrevivência e morte celular. Além disso, desenvolveremos uma metodologia para silenciamento de 16 genes envolvidos em reparo de DNA, em células deficientes em NER, empregando lentívírus recombinantes expressando shRNA direcionado a esses genes. Desta forma, pretendemos identificar interações entre NER e outras vias de reparo de DNA. (AU)