Analise por microarray de genes diferencialmente expressos entre linhagens de mama tratadas e nao tratadas com o peptideo bioativo de laminina c16

Resumo

O câncer de mama representa 10% de todos os tumores malignos e estima-se que 49.400 casos novos serão diagnosticados no Brasil em 2008. Um conjunto complexo de alterações genéticas está envolvido em sua origem e progressão, as quais podem conferir aos tumores maior potencial proliferativo, evasão a apoptose, angiogênese sustentada e capacidade de invadir e formar metástases. Neste processo, moléculas da matriz extracelular desempenham um importante papel e estão freqüentemente alteradas em tumores invasivos. Nosso laboratório vem estudando o papel da laminina e de seus peptídeos bioativos na biologia de tumores glandulares. Nossos dados mostraram que o peptídeo C16, derivado da cadeia gama-1 da laminina 111, induz migração, invasão e atividade proteolítica em células glandulares. Entretanto, os programas de expressão gênica que são ativados na presença deste peptídeo ainda não foram esclarecidos. Assim, nossos objetivos são verificar quais genes são diferencialmente expressos entre linhagens de mama (MCF-10A, MCF-7 e MDA-MB-231) tratadas com o peptídeo bioativo da laminina C16 ou com seu peptídeo controle scrambled. Após tratamento das células com os peptídeos, estas serão coletadas para extração de RNA total, seguida de síntese de cDNA, síntese e purificação de cRNA e hibridização com membrana de microarray contendo 113 genes representativos de processos biológicos associados ao câncer. A detecção dos cRNAs hibridizados será realizada por quimioluminescência e o programa GEArray Expression Analysis Suite será utilizado para normalização e análise dos dados. (AU)