Caracterização estrutural das proteínas alpha-4 e TipRL e de seus complexos com as subunidades catalíticas das fosfatases do tipo 2A

Resumo

A via sensível à rapamicina (ou via da TOR – “Target Of Rapamycin”) é responsável pelo controle de processos relacionados ao crescimento celular em organismos eucarióticos. Alterações no seu funcionamento estão diretamente relacionadas a doenças como cânceres e diabetes. TOR, a proteína quinase central dessa via, atua através da fosforilação de diversos substratos, resultando na modulação da transcrição e tradução de vários genes e no controle da morfologia celular. Em mamíferos, a associação entre a proteína Alpha-4 e a subunidade catalítica da fosfatase PP2A (PP2Ac) resulta na inativação do inibidor da transcrição 4E-BP1, um processo que regula a atividade do fator de tradução eIF4E que é mediado pela via de sinalização da TOR. A constatação de que a Alpha-4 também se liga às fosfatases PP4 e PP6, alterando suas atividades, supõe um papel fundamental dessas interações no desencadeamento da sinalização da TOR. No entanto, pouco se sabe a respeito de como ocorrem tais interações, uma vez que não há uma explicação estrutural para o mecanismo de ação e função reguladora dessas proteínas. Diante do exposto, o presente projeto objetiva elucidar a estrutura tridimensional das proteínas Alpha-4 e TipRL (reguladora da Alpha-4) e seus complexos com as fosfatases (PP2Ac, PP4c e PP6c), por cristalografia de raios-X. Uma vez que a atividade destas proteínas envolve a formação reversível de complexos de acordo com sinais fisiológicos e estímulos ambientais, a elucidação da estrutura tridimensional dessas moléculas e seus complexos permitirá uma compreensão do mecanismo molecular pelo qual a via da TOR é regulada e sua implicação no metabolismo.