Estudo da localizacao nuclear de rna de rinovirus e sua participacao no ciclo replicativo viral.

Resumo

Os rinovírus humanos (HRV) são os mais frequentes agentes etiológicos de resfriado comum, chegando a ser responsáveis por 80% dos casos sintomáticos em adultos durante pico sazonal anual nos Estados Unidos. HRV pode estar associado a manifestações do trato respiratório inferior, incluindo chiado brônquico, exacerbação de asma e também predispor a doenças bacterianas secundárias, como sinusite, otite média aguda e otite média com efusão.Os rinovírus (human rhinovirus- HRV) pertencem à família Picornaviridae, com genoma de RNA de polaridade positiva. O conhecimento largamente aceito de que todo o ciclo replicativo dos picornavírus se passa no citoplasma vem sendo modificado por evidências recentes da localização nuclear de proteínas que interagem com RNA viral. Trabalhos recentes indicam que há migração de proteínas não estruturais de picornavírus para o núcleo, onde funcionariam induzindo “shutoff” transcricional dos genes da célula hospedeira. Dados preliminares obtidos por hibridização in situ de RNA de HRV-39 com detecção por ouro coloidal, indicam a presença no núcleo de células HeLa 10 horas após a infecção com esse vírus. Além disso, experimentos de RT-PCR realizados com preparações de núcleos de células HeLa infectadas corroboram indiretamente essa observação. Nesse experimento, o sinal de RT-PCR se torna mais forte em preparações de núcleo à medida que a infecção progride. Considerando os dados existentes na literatura e os nossos experimentos preliminares, propomos no presente projeto investigar a presença das espécies de RNA viral (+) e (-) no núcleo de células infectadas por HRV-39, através de método de hibridização in situ fluorescente. Além disso, pretendemos fazer um estudo quantitativo ds espécies de RNA (+) e (-), em preparações de núcleo e de membranas de organelas de células infectadas por PCR em tempo real, ao longo do ciclo replicativo viral. Tal estudo visa compreender a perticipação do núcleo na replicação de RNA de um picornavírus de importância em saúde pública, assim contribuindo para entender a biologia celular deste agente com possíveis repercussões no entendimento de sua patogênese.