Purificação, formulação e ensaio pré-clínico do FVIII recombinante produzido em células humanas.

Resumo

A hemofilia A é uma doença genética ligada ao cromossomo X que resulta na deficiência ou anormalidade da proteína do fator VIII (FVIII). A terapia de reposição utilizando proteína derivada do plasma humano ou recombinante produzida em linhagens celulares de hamster (CHO e/ou BHK) são as únicas opções terapêuticas disponíveis. Contudo, um dos maiores problemas da terapia de reposição é a formação de anticorpos inibitórios contra os fatores recombinantes, sendo esta a complicação mais significativa relacionada ao tratamento de pacientes hemofílicos. A utilização de linhagens não-humanas introduz epitopos imunogênicos (a-Gal e Neu5Gc) no FVIII que afetam a eficácia e meia-vida da proteína. Nos últimos 10 anos, foi desenvolvido no Hemocentro de Ribeirão Preto linhagens humanas produtoras de FVIII. Nosso grupo de pesquisa, conseguiu aumentar nossa escala de produção de FVIII que no início chegava a poucos mililitros para cerca de 40 litros de caldo. Atualmente, somos capazes de produzir em biorreator operado em modo perfusão cerca de 50.000 UI de FVIII. Nosso FVIIIr é produzido em células humanas o qual contém glico-estruturas semelhantes ou idênticas ao FVIII do plasma, culminando num produto mais eficiente, menos imunogênico e mais seguro para a utilização a longo prazo. O objetivo da presente proposta é purificar o FVIII produzido em nosso laboratório, determinar o perfil de glicosilação (em parceria com a Universidade de Manitoba, Canadá), formular o FVIII com nanoparticulas e realizar o primeiro ensaio pré-clínico no país. Este trabalho pode trazer como benefício para a sociedade brasileira a possibilidade de obtenção de um medicamento mais eficiente, menos imunogênico e com custo de produção menor. Além da tecnologia que será gerada, este projeto contribui para formação de recursos humanos com características multidisciplinares. (AU)