Desenvolvimento e aplicação de sondas fluorescentes e baseadas em dicroísmo circular para estudos de interação de ligantes com proteínas, caracterização de proteínas amiloides e determinação de atividade enzimática

Resumo

São inúmeras as evidências apresentadas na literatura científica que demonstram o papel dos ácidos hipo-halosos, ou seja, ácido hipocloroso (HOCl) e hipobromoso (HOBr) como agentes de degradação de biomoléculas. Nesta mesma direção, inibidores das enzimas envolvidas direta ou indiretamente na biossíntese desses oxidantes são objeto de busca como alvos para o desenvolvimento de novos fármacos. Em uma das vertentes desse projeto pretendemos dar continuidade em nossa contribuição nesta área. Especificamente, um dos nossos objetivos será estudar e desenvolver sondas fluorescentes capazes de determinar de modo específico a atividade halogenante das enzimas mieloperoxidase (MPO) e peroxidase de eosinófilos (EPO) que são as responsáveis pela geração endógena de HOCl e HOBr. Em outra vertente, pretendemos desenvolver uma metodologia também baseada em sondas fluorescentes para diferenciar as características antioxidante e pró-oxidante de compostos fenólicos de origem natural e sintética. Outro tema central que desenvolveremos neste projeto é a aplicação da técnica de dicroísmo circular para estudo da interação de ligantes com proteínas e caracterização de agregados amilóides em proteínas. Especificamente, trata-se do estudo e desenvolvimento de compostos que se liguem em proteínas e que sejam susceptíveis a indução de quiralidade, ou seja, que passem a apresentar sinais de dicroísmo circular induzido somente quando ligados à proteína. Através dessa técnica pode-se estudar alterações na estrutura da proteína em função do meio, alterações por oxidação, temperatura, etc. Pretendemos aplicar este fenômeno para caracterizar agregados amilóides em proteínas. Temos convicção de que estes estudos poderão culminar no desenvolvimento de novas técnicas sensíveis e seletivas para analisar e monitorar danos causados por espécies reativas de oxigênio em biomoléculas. (AU)