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Análise da Comunidade Bacteriana Metabolicamente Ativa nas Infecções Endodônticas Persistentes após Diferentes Protocolos Clínicos de Desinfecção: Estudo Molecular baseado em RNA e DNA

Processo: 16/15473-0
Modalidade de apoio:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de fevereiro de 2017 - 31 de janeiro de 2019
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Odontologia - Endodontia
Pesquisador responsável:Ericka Tavares Pinheiro
Beneficiário:Ericka Tavares Pinheiro
Instituição Sede: Faculdade de Odontologia (FO). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Pesquisadores associados:Giulio Gavini ; Marcia Pinto Alves Mayer
Assunto(s):Sequenciamento de alta performance  Reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa quantitativa (qRT-PCR) 
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:Infecção endodôntica persistente | PIPs | protocolos de irrigação | RT-qPCR | Sequenciamento de alta performance | tratamento endodôntico | Endodontia

Resumo

O sucesso do tratamento endodôntico em dentes com polpa necrótica e periodontite apical depende da redução de micro-organismos viáveis dos canais radiculares através de procedimentos endodônticos de desinfecção. Nossos dados recentes indicaram que associação de métodos moleculares baseados em rRNA e rDNA possibilita a avaliação simultânea da atividade metabólica e abundância das espécies/ taxa em uma comunidade bacteriana. Esta proposta visa avaliar, por métodos moleculares, o efeito de diferentes protocolos de desinfecção em dentes com periodontite apical sobre a redução, diversidade e atividade metabólica microbiana. Serão selecionados 75 pacientes com necrose pulpar e periodontite apical. Coletas microbiológicas dos canais radiculares serão realizadas no início do tratamento endodôntico (S1) e após o preparo químico-mecânico com Sistema Reciproc e NaOCl 2,5% (S2). A seguir, os pacientes serão igualmente divididos em grupos de acordo com procedimentos complementares de desinfecção realizados após o preparo químico-mecânico: Grupo XP (XP-endo Finisher), Grupo PIPS (irrigação ativada a laser utilizando as pontas PIPS, do inglês Photon-Induced Photoacoustic Streaming) e Grupo IC (irrigação convencional com seringas, sem ativação). Novas coletas microbiológicas dos canais radiculares serão realizadas após os procedimentos complementares de desinfecção (S3) e após a medicação intracanal com hidróxido de cálcio por 14 dias (S4) e re-instrumentação dos canais radiculares antes da obturação (S5). As amostras dos canais radiculares serão submetidas à extração de ácidos nucleicos totais. O efeito dos protocolos de tratamento sobre a microbiota total será determinado por qPCR baseada em rDNA, utilizando iniciadores universais para o domínio Bacteria. RNA das amostras S1, S3 e S4 de 30 pacientes (10 de cada grupo) será utilizado para determinar a diversidade da microbiota metabolicamente ativa, por reação de transcriptase reversa (RT), seguida de amplificação (PCR) e sequenciamento de alta performance da região hipervariável V1-V2-V3 do gene 16S rRNA. A atividade metabólica das espécies/taxa mais prevalentes nas infecções persistentes será calculada pela razão rRNA/rDNA utilizando qPCR com iniciadores espécie-específicos. Os dados serão analisados por testes estatísticos, com nível de significância de 5%. (AU)

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Publicações científicas (4)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
NARDELLO, LAURA C. L.; PINHEIRO, ERICKA T.; GAVINI, GIULIO; PRADO, LAIS C.; ROMERO, ROBERTO X.; GOMES, BRENDA P. F. A.; SKELTON-MACEDO, MARY C.. Nature and Prevalence of Bacterial Taxa Persisting after Root Canal Chemomechanical Preparation in Permanent Teeth: A Systematic Review and Meta-analysis. JOURNAL OF ENDODONTICS, v. 48, n. 5, p. 25-pg., . (16/15473-0)
PRADO, LAIS CUNHA; GAVINI, GIULIO; SILVEIRA, AMANDA DA COSTA; NAKAMURA, VITOR CESAR; ALVES MAYER, MARCIA PINTO; PINHEIRO, ERICKA TAVARES. Comparison of rRNA-based reverse transcription PCR and rDNA-based PCR for the detection of streptococci in root canal infections. Journal of Applied Oral Science, v. 27, . (16/15473-0, 13/02923-9)
NARDELLO, LAURA C. L.; VILELA, BRUNA G.; FERNANDES, FERNANDA S.; BRUNO, FERNANDA P.; CARVALHO, ALEXANDRE P. L.; CAZARES, ROBERTO X. R.; NASCIMENTO, LAIS C. P.; HONORIO, HEITOR M.; ANDO, ELLEN S.; MAYER, MARCIA P. A.; et al. Analysis of Active Bacteria Persisting after Chemomechanical Procedures: An RNA- and DNA-based Molecular Study. JOURNAL OF ENDODONTICS, v. 46, n. 11, p. 7-pg., . (16/15473-0)
CARVALHO, ALEXANDRE P. L.; NARDELLO, LAURA C. L.; FERNANDES, FERNANDA S.; BRUNO, FERNANDA P.; PAZ, LUIZA R.; IGLECIAS, ELAINE F.; HONORIO, HEITOR M.; MAYER, MARCIA P. A.; GAVINI, GIULIO; PINHEIRO, ERICKA T.. Effects of Contemporary Irrigant Activation Schemes and Subsequent Placement of an Interim Dressing on Bacterial Presence and Activity in Root Canals Associated with Asymptomatic Apical Periodontitis. JOURNAL OF CLINICAL MEDICINE, v. 9, n. 3, . (16/15473-0)

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